第一代腺病毒載體:一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱為第一代腺病毒載體,此類型載體在未經過純化時可引發機體產生較強的炎癥反應和免疫反應,純化后可以安全使用,體內表達周期可達4周。第二代腺病毒載體:E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱為第二代腺病毒載體,產生的免疫反應較弱其載體容量和安全性方面有所改進,但病毒包裝難度和出毒和病毒滴度下降厲害,目前應用相當局限。第三代腺病毒載體:第三代載體缺失了全部的(無病毒載體,gutless vector)或大部分腺病毒基因(微型腺病毒載體,mini Ad),僅可保留ITR和包裝信號序列。第三代腺病毒載體最大可插入35kb的基因,病毒蛋白表達引起的細胞免疫反應進一步減少,載體中引入核基質附著區基因可使得外源基因保持長期表達,并增加了載體的穩定性。這一載體系統需要一個腺病毒突變體作為輔助病毒。目前,第一代腺病毒載體仍是科研和臨床應用最為廣泛的腺病毒載體。一般常用Ad5型腺病毒。......閱讀全文
腺病毒的一般特性??? 腺病毒的形態是特征性的二十面體病毒殼體(Stewart et al., 1993)。其病毒殼體含有三種主要的蛋白:六鄰體(II),五鄰體基底(III)和纖突(IV),還有多種其他的輔助蛋白VI,VIII,IX,IIIa和Iva2(Fig. 1)。腺病毒基因組是一個線性的雙鏈D
其他療法 ??? 隨著高齡人口的增加,對于人神經退化疾病如帕金森氏病的治療提出了一個重要的挑戰。腺病毒,因其可以感染有絲分裂后的細胞,同時具有潛在的高轉導效率和在中樞神經系統免疫特惠區(immunologically privileged site)中的低病原性,因此是進行神經疾病基因治療的有效
第一代腺病毒載體:一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體稱為第一代腺病毒載體,此類型載體在未經過純化時可引發機體產生較強的炎癥反應和免疫反應,純化后可以安全使用,體內表達周期可達4周。第二代腺病毒載體:E2A或E4基因缺失的腺病毒載體被稱為第二代腺病毒載體,產生的免疫反應較弱其載體容量和安全性方面有所
它的優點體現在轉基因效率高,通過體外實驗檢測結果顯示,它能達到將近100%的轉導效率,能轉到不同類型的人組織細胞。它的缺點體現在:第一,基因組不能整合到宿主基因組上。第二,感染范圍較廣,缺乏明顯的靶向性,有可能會讓人的正常組織細胞被感染,產生一定不良反應。第三,它跟機體靶向細胞結合的同時會對異己抗原
1 菌液的準備1.1. 取含目的質粒的甘油菌液(-80℃或-20℃冰箱中),待菌液融化后,在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上,37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落,挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液,則需取庫存質粒進行轉化,然后挑單克隆搖菌。1.2. 將單克隆接種于5ml氨芐
通常來說,開發一種新型疫苗需要經過數年的艱苦過程,包括完整的生產工藝確定。這樣的模式沒辦法對一些爆發性的傳染疾病做出快速響應,而且面對一些商業潛力比較小的區域性疾病或者是某些定制化疫苗也是力有不逮。?在病毒載體家族里面,腺病毒的應用非常廣泛,它具有誘導抗體和T細胞組合反應的潛能。雖然人群中廣泛存在的
實驗概要腺病毒載體,廣泛用于外源基因轉移到神經膠質細胞,具有細胞毒性。利用腺病毒載體轉染神經細胞已經盛行,因為腺病毒載體除了感染細胞后有限的細胞毒性,還利于長期表達轉基因。主要試劑人類胚胎腎(HEK)293T細胞腺病毒轉移載體質粒腺病毒包裝載體PLP1,pLP2(之前),PLP / VSVGDMEM
1 菌液的準備 1.1. 取含目的質粒的甘油菌液(-80℃或-20℃冰箱中),待菌液融化后,在超凈臺用接種環劃線于氨芐抗性的平板上,37℃倒置培養12-16h。待平板長出菌落,挑選生長狀態良好的單克隆菌落。若無目的質粒的菌液,則需取庫存質粒進行轉化,然后挑單克隆搖菌。 1.2. 將單
實驗材料感興趣的基因試劑、試劑盒具有卡那霉素抗性的 LB 培養基限制性內切核酸酶穿梭載體 DNA乙酸銨苯酚 氯仿 異戊醇乙醇電促感受態 BJ5183 細胞感受態 DH10B 細胞HBSS 或滅菌的 PBS儀器、耗材鋪有卡那霉素抗性的 LB 固體培養基皿瓊脂糖凝膠脂質轉染 AMINE 試劑Opti-M
Science | 為腺病毒載體疫苗設計提供新策略——黏膜相關恒定T(MAIT)細胞激活顯著增強腺病毒載體誘導的T細胞反應 黏膜相關恒定T(MAIT)細胞是一類非常規的T細胞,可以識別微生物衍生的維生素B2生物合成代謝產物,如5-(2-氧代氧亞丙基氨基)-6-(d-核糖胺基) 尿嘧啶(5-OP