實驗概要采用TAKARA的試劑提取水稻胚乳,主要是后期的胚乳RNA量偏少,不易提取!實驗步驟1. 稱量100mg的新鮮或者超低溫凍結的植物RNA提取樣品,迅速轉移至用液氮預冷的研缽中,用研杵研磨組織,其間不斷加入液氮,直至研磨成粉末狀。2. 向研缽中加入1000μL RNAiso-mate for Plant Tissue(TAKARA),將樣品完全覆蓋,然后室溫靜置,至樣品完全融化,再用研杵繼續研磨至裂解液成透明狀。3. 將勻漿液轉移至1.5ml的離心管中,12,000g 4℃離心5min。4. 小心吸取上清液,平均分至2個新的1.5ml離心管中。分別向上清液中加入等體積的RNAiso Plus(TAKARA),蓋緊離心管用力振蕩,待充分乳化后,室溫靜置5min。5. 向混合液中加入1/5體積氯仿,蓋緊離心管,劇烈振蕩15s,待充分乳化后,室溫靜置5min。6. 12,000g 4℃離心15min......閱讀全文
一、RNA 制備 模板mRNA 的質量直接影響到cDNA 合成的效率。由于mRNA 分子的結構特點,容易受RNA 酶的攻擊反應而降解,加上RNA 酶極為穩定且廣泛存在,因而在提取過程中要嚴格防止RNA 酶的污染,并設法抑制其活性,這是本實驗成敗的關鍵。所有的組織中均存在RNA 酶,人
填補Qiagen空白、不用DNA酶消化的植物RNA提取試劑盒 一般公司多糖多酚植物RNA提取試劑盒失敗原因和解決方案 很多植物RNA的樣品由于含有大量的多糖、多酚、代謝產物、色素等成分,造成RNA提取過程中氧化、褐化、降解、由于植物品種的多樣性造成情況更加復雜。手工的CTAB類的
基因組DNA的提取概 述 基因組DNA的提取通常用于構建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中, 可用玻棒將其取
實驗材料:小麥 試劑、試劑盒:β-巰基乙醇 &nb
植物RNA提取可應用于:(1)進行植物分子生物學方面的研究;(2)進行Northern雜交分析、純化mRNA以用于體外翻譯或cNDA文庫構建等研究。實驗方法原理通過裂解液β-巰基乙醇迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶,植物RNA助提劑PLANTaid幫助結合多糖多酚并通過離心去除,然后用乙醇調節結合條件
眾多文獻報道,許多植物由于未能有效地分離純化出其組織中的RNA, 而阻礙了其分子生物學方面的研究進展。比如Northern雜交分析,體外翻譯分析或建cDNA文庫,RT-PCR及差異顯示分析等研究,都需要高質量的RNA。因此,提取純度高、完整性好的RNA是順利進行上述研究的關鍵所在。RNA提取的常見難
直接研磨法 液氮研磨法 實驗方法原理 通過裂解液β-巰基乙醇迅速裂解細胞和滅活細胞RNA
提取植物DNA時遇到多糖成分的干擾, DNA質量一直不高,如何消除多糖的影響?參考見解:一般來說,SDS法提取的DNA會還有較多的多糖,使DNA成膠凍狀。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比較高,可用以下方法試一試:1、 在 DNA 未溶出之前,先用一些緩沖液洗去多糖。如可用
第一節 概 述DNA的提取通常用于構建文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中,可用玻棒將其取出,而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部,
完整RNA的提取和純化,是進行RNA方面的研究工作,如Nothern雜交、mRNA分離、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及體外翻譯等的前提。所有RNA的提取過程中都有五個關鍵點,即1):樣品細胞或組織的有效破碎;2),有效地使核蛋白復合體變性;3),對內源RNA酶的有效抑制;4)有
實驗概要本實驗以水稻幼苗(禾本科)、李(蘋果)葉子為材料,學習基因組DNA提取的一般方法。實驗原理基因組DNA的提取通常用于構建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長的特性,可以將其與細胞器或質粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的
如何提取小小的miRNA(microRNA),各大生物技術公司均推出了自己的試劑盒,國內知名核酸純化公司百泰克針對不同來源的樣本亦推出了一系列擁有自己獨特技術的miRNA(microRNA)提取試劑盒! m
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工
RNA提取試劑的選擇RNA提取對于科研人員來說并不陌生,但是要得到好的結果卻不是一件很容易的事情。事實上,現在市面上的豐富的RNA提取試劑基本上可以滿足科研人員的需要,為什么往往提取的RNA卻容易失敗呢?RNA提取失敗的主要現象有三個:提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA純度低。究竟
從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了解轉錄后加工等一系列問題。總之
實驗概要本實驗介紹了樣品總RNA的提取方法。完整RNA的提取和純化,是進行RNA方面的研究工作,如Nothern雜交、mRNA分離、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及體外翻譯等的前提。所有RNA的提取過程中都有五個關鍵點,即:樣品細胞或組織的有效破碎;有效地使核蛋白復合體變性;對內源RNA酶的
實驗概要本實驗對水稻、擬南芥及楊樹的TLP基因表達模式進行了分析,為進一步研明植物中TLP基因的功能奠定基礎。實驗步驟1. 水稻TLP基因的RT-PCR分析 1) 植物材料選取水稻的根、莖、葉、花和種子的新鮮組織用于RNA的提取。水稻材料采集后,用液氮速凍,以保證RNA不被降
TRIzol試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用,與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化,細胞裂解,溶解細胞內含物,同時因含有RNase抑制劑可保持RNA
實驗方法原理 TRIzol 試劑是分離細胞和組織總 RNA 的即用型試劑,該試劑含有酚和硫氰酸胍單相溶液是 Chomczynski 和 Sacchi 進一步分離 RNA 方法的進
實驗方法原理TRIzol 試劑是分離細胞和組織總 RNA 的即用型試劑,該試劑含有酚和硫氰酸胍單相溶液是 Chomczynski 和 Sacchi 進一步分離 RNA 方法的進一步改進。在勻漿或裂解樣本過程屮,TRIzol 試劑不僅可裂解細胞,而且可保持 RNA 的完整。加入氯仿后離心,溶液則分為水
先進科技 搶先體驗你還在為你的核酸提取發愁嗎?你還在為你的科研經費發愁嗎?東西越貴就一定越好嗎?不!體驗一下BioTeke給你帶來的從核酸提取、PCR、RT-PCR到熒光定量的完美解決方案吧! ¤ 你知道如何保護樣品的RNA不降解嗎?已經有很多人在用了,如果你還不知道,趕快行動吧
第一節 概 述 從真核生物的組織或細胞中提取mRNA,通過酶促反應逆轉錄合成cDNA的第一鏈和第二鏈,將雙鏈cDNA和載體連接,然后轉化擴增, 即可獲得cDNA文庫,構建的cDNA文庫可用于真核生物基因的結構、表達和調控的分析;比較cDNA和相應基因組DNA序列差異可確定內含子存在和了
TRIzol試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用,與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化,細胞裂解,溶解細胞內含物,同時因含有RNase抑制劑可保持RNA
高通量測序技術已廣泛應用于植物研究中,但植物材料中較多的蛋白質、多糖以及酚、脂類等次生代謝物質,提取核酸的難度往往比動物或原核生物樣本大,因此如何從植物樣本中得到高質量的核酸進行后續的測序,成為在植物高通量測序應用中的首要因素。根據核酸類型,可有如下制備方法可參考: 1. 植物基因組 DNA
TRIzol試劑適用于從細胞和組織中快速分離RNA。TRIzol試劑有多組分分離作用,與其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、鹽酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特點是可同時分離一個樣品的RNA\DNA\蛋白質.TRIzol使樣品勻漿化,細胞裂解,溶解細胞內含物,同時因含有RNase抑制劑可保持RNA
提取植物DNA時遇到多糖成分的干擾, DNA質量一直不高,如何消除多糖的影響? 參考見解:一般來說,SDS法提取的DNA會還有較多的多糖,使DNA成膠凍狀。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比較高,可用以下方法試一試: 1、 在 DNA 未溶出之前,先用一
核酸的分離與純化技術是生物化學與分子生物學的一項基本技術。隨著分子生物學技術廣泛應用于生物學、醫學及其相關等領域,核酸的分離與純化技術也得到進一步發展。各種新方法、經完善后的傳統經典方法以及商品試劑方法的不斷出現,極大地推動了分子生物學的發展。現就核酸分離與純化的原理及其方法學進展作一綜
核酸的分離與純化技術是生物化學與分子生物學的一項基本技術。隨著分子生物學技術廣泛應用于生物學、醫學及其相關等領域,核酸的分離與純化技術也得到進一步發展。各種新方法、經完善后的傳統經典方法以及商品試劑方法的不斷出現,極大地推動了分子生物學的發展。現就核酸分離與純化的原理及其方法學進展作一綜述。核酸分離
磁珠法純化DNA主要是利用利息交換吸附材料吸附核酸,從而將核酸和蛋白質等其細胞中其他物質分離。本文主要概述了磁珠法純化DNA原理、核酸分離與純化的原則、核酸分離與純化的步驟。磁珠法 純化DNA原理磁珠法核酸純化技術采用了納米級磁珠微珠,這種磁珠微珠的表面標記了一種官能團,能同核酸發生吸附反應。硅磁(
實驗材料小麥試劑、試劑盒β-巰基乙醇氯仿異戊醇SSTE 緩沖液儀器、耗材SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗步驟3.1 芯片背景我們使用了 19846 個點,包含 9246 個 Unigene 序列的小麥 cDNA 芯片(http://www . cerealsdb. uk. net/index. htm