WIKI資訊
一、亞硫酸氫鈉修飾過程中可能出現的問題及應對措施亞硫酸氫鈉修飾DNA的目的是將DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全轉化為尿嘧啶，而甲基化的5一甲基胞嘧啶保持不變。影響此過程的主要因素有修飾試劑的濃度、反應溫度、反應環境的pH值及反應時間。其中任何一個環節出現問題都將導致MSP擴增失敗，體會如下：(1)亞硫酸氫鈉的濃度最好控制在3．0～3．9 mol/L為好，其pH值必須用NaOH精確調整至5．0；(2)修飾時間應掌握在10～16 h，修飾時間過長會導致甲基化胞嘧啶也會轉化成尿嘧啶且DNA模板破壞加劇，而時間過短會導致修飾不徹底；(3)反應溫度應控制在50～55℃(若用國產恒溫水浴箱建議溫度設定在53℃為好)；(4)DNA模板量應控制在<2ug為宜。只要遵循以上幾點基本上能保證99％ 未甲基化的胞嘧啶轉化尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變。但是，此修飾過程中模板DNA有約96％已經降解 。當DNA樣品較少時(如石蠟包埋組織、血清D......閱讀全文
亞硫酸氫鈉法 實驗方法原理 MSP是一種簡便、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方式。其基本原理是用
實驗方法原理 MSP是一種簡便、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因 組DNA，未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變，然后用3對特異性的引物對所測基因的同一核苷酸序列進行擴增。擴增產物用DNA瓊脂糖凝膠電泳，凝膠掃描觀察分析結果。實驗材料 DNA
實驗材料 樣本 DNA試劑、試劑盒 NaOH對苯二酚重亞硫酸鈉礦物油DNA Wizard cleanup kit (Promega) 或等同物異丙醇 糖苷配糖基乙酸胺乙醇10 X PCR 擴增緩沖液4dNTP 混合物Taq DNA 聚合酶儀器、耗材 水浴設備Vacuum manifold帶控制管溫度
甲基化特異性 PCR(Methylmion Specific PCR，MSP)及其改進方法是檢測基因甲基化的經典方法．MSP法的原理是首先用亞硫酸氫鈉修飾處理基因組DNA，所有未發生甲基化的胞嘧啶都被轉化為 尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則不變。然后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物并進行聚合酶
用 PCR 來分析 DNA 甲基化的方法可以運用于：（1）對基因組中任何位置的 CpG 甲基化的分析；（2）檢測腫瘤患者的基因改變以及介人被印的基因的固定遺傳障礙的研究。實驗方法原理DNA甲基化（DNA methylation）是最早發現的修飾途徑之一，大量研究表明，DNA甲基化能引起染色質結構、D
甲基化特異性PCR主要用于特意位點甲基化的檢測。實驗方法原理MSP是一種簡便、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因 組DNA，未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變，然后用3對特異性的引物對所測基因的同一核苷酸序列進行擴增。擴增產物用DNA瓊脂糖凝膠電泳，
實驗材料甲基化特異性PCR (MSP) 產物試劑、試劑盒適合的限制性內切核酸酶和緩沖液牛血清白蛋白糖苷配糖基1 X 甲酰胺上樣緩沖液乙醇實驗步驟1.在 1.5 ml 管中加入 10ul MSP 產物。加入 15ul 10 X 限制性內切核酸酶和緩沖液，需要的話加 BSA，加水至 150ul。加入 1
相關專題1 甲基化敏感性限制性內切酶 (methylation-sensitive restriction Endonuclease，MS-RE)-PCR/Southern法這種方法利用甲基化敏感性限制性內切酶 對甲基化區的不切割的特性，將DNA消化為不同大小的片段后再進行分析。常使用的甲基化敏感的
基因甲基化特異性PCR擴增（MSP）試劑盒產品說明書(中文版) 主要用途 基因甲基化特異性PCR擴增（MSP）試劑盒是一種旨在通過設計符合胞嘧啶轉化的特殊引物，對轉化基因組的CpG島區域進行PCR擴增，探測基因甲基化信息的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。可以
主要用途基因甲基化特異性PCR擴增（MSP）試劑盒是一種旨在通過設計符合胞嘧啶轉化的特殊引物，對轉化基因組的CpG島區域進行PCR擴增，探測基因甲基化信息的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。可以被用于父母印記、X染色體研究、腫瘤抑制基因等表觀遺傳學研究。產品即到即用，性能穩定