PCR實驗技巧5
Trouble shooting guide 1．假陰性，不出現擴增條帶 PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。 模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不徹底。在酶和引物質量好時，不出現擴增帶，極有可能是標本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩定的消化處理液，其程序亦應固定不宜隨意更改。 酶失活：需更換新酶，或新舊兩種酶同時使用，以分析是否因為酶的活性喪失或不夠而導致假陰性。需注意的是有時PCR時忘了加Taq酶或電泳時忘了加溴化乙錠。 引物：引物質量、引物的濃度、兩條引物的濃度是否對稱，是PCR失敗或擴增條帶不理想、容易彌散的常見原因。有些批號的引......閱讀全文
PCR實驗技巧5
Trouble shooting guide?1．假陰性，不出現擴增條帶?PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。?模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染
PCR實驗技巧5
Trouble shooting guide?1．假陰性，不出現擴增條帶?PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。?模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染
PCR實驗技巧1
增加PCR的特異性：?1. prime理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60%?c. 5'端和中間序列要多GC,以增
PCR實驗技巧3
11. Template DNA preparation?提取DNA時的試劑會抑制PCR反應的順利進行.因此需要對TEMPLATE DNA進行純化.特別是SDS(
PCR實驗技巧2
5. touchdown PCR?原理很簡單,但的確是一個很有用的方法。舉個例子，ANNEALING TEMP. 55度?94 5min 94 30s 60 30s 72 1min 2cycles 94 30s 59 30s?72 1min 2cycles 94 30s 58 30s 72 1min
PCR實驗技巧4
④引物的額外序列與退火溫度?若有額外的序列信息要加到引物中，例如T7RNA聚合酶結合位點、限制酶切位點或者GC發夾結構可以使用加長的引物。一般說來，引物5'端添加無關序列不會影響引物特異序列的退火。有時候，引物中添加了大量與模板不配對的堿基，可以在較低退火溫度的條件下進行4到5個擴增循環；然
PCR使用技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60% c. 5&
PCR使用技巧
基本PCR引物設計參數?引物設計的目的是在兩個目標間取得平衡：擴增特異性和擴增效率。特異性是指發生錯誤引發的頻率。特異性不好或劣等的引物會產生額外無關和不想要的PCR擴增子，在EB染色的瓊脂糖凝膠上可見到；引物效率是指在每一PCR循環中一對引物擴增的產物與理論上成倍增長量的接近程度。?①引物長度；?
PCR實用技巧
增加PCR的特異性： 1. primers design 這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件 a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量 b. GC% 40%~
PCR引物設計技巧
自從1985年美國PE—Cetus公司的人類遺傳研究室 Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應（PCP0 以來，PCR已經成為了分子生物學領域zui基本也是zui重要的技術手段之-[ I。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動
PCR引物設計技巧
自從1985年美國PE—Cetus公司的人類遺傳研究室 Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應(PCP0 以來，PCR已經成為了分子生物學領域最基本也是最重要的技術手段之-[ I。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動物遺傳育
pcr實用技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些條件a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的引物同樣會降低特異性,并且降低產量b. GC% 40%~~~~60% c. 5&
PCR實用技巧
PCR實用技巧增加PCR的特異性：?1. primers design?這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件?a. 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量?b. G
PCR引物設計技巧
自從1985年美國PE-Cetus公司的人類遺傳研究室 Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈反應（PCP） 以來，PCR已經成為了分子生物學領域最基本也是最重要的技術手段之一 。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動物遺
PCR實用小技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是最重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件1) 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量2) GC% 40%~60%3
PCR儀使用技巧解析
PCR儀使用技巧解析：PCR儀屬于高端科學產品，在實驗室的使用中，如果不細讀好產品的說明書，以及相關的介紹，將會對pcr儀造成很大的傷害，所以應該做好以下6方面的注意事項。 1.仔細閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤 2.程序設計完成后，一定要仔細檢查，以免出錯造成損失
pcr實用技巧2
1．簡介寡聚核苷酸引物的選擇，通常是整個擴增反應成功的關鍵。所選的引物序列將決定PCR產物的大小、位置、以及擴增區域的Tm值這個和擴增物產量有關的重要物理參數。好的引物設計可以避免背景和非特異產物的產生，甚至在RNA-PCR中也能識別cDNA或基因組模板。引物設計也極大的影響擴增產量：若使用設計粗糙
PCR技術服務PCR的實用技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是zui重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件1) 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量2) GC% 40%~60
PCR的幾個實用小技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是zui重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件1) 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量2) GC% 40%~60
PCR引物設計及軟件使用技巧
PCR引物設計及軟件使用技巧張新宇，朱有康，高燕寧（中國協和醫科大學中國醫學科學院腫瘤研究所，北京100021）摘要：本文旨在介紹使用軟件設計PCR引物的技巧。在PCR引物設計原則的基礎上，詳細介紹了兩種常用引物設計軟件的基本使用方法，并對其各自的優缺點進行了比較。一般性引物自動搜索可采用“Prem
PCR引物設計知識與技巧分析
PCR引物設計知識與技巧分析自從1985年Mullis等發明了具有劃時代意義的聚合酶鏈式反應（PCP） 以來，PCR已經成為了分子生物學領域zui基本也是zui重要的技術手段之一。然而能否找到一對合適的核苷酸片段作為引物，使其有效地擴增模板DNA序列，無疑決定著PCR的成敗。現在動物遺傳育種早已進入
PCR儀基因擴增儀的選擇技巧
PCR儀基因擴增儀的選擇技巧?PCR原理?DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的作用下，以單鏈為模版，根據堿基互補配對原則復制成新的單鏈，與模版配對成為雙鏈分子挎貝。在體外實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后
PCR儀基因擴增儀的選擇技巧
PCR儀基因擴增儀的選擇技巧?PCR原理?DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的作用下，以單鏈為模版，根據堿基互補配對原則復制成新的單鏈，與模版配對成為雙鏈分子挎貝。在體外實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后
PCR儀使用中的一些小技巧
PCR儀使用中的一些小技巧 1.仔細閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤 2.程序設計完成后，一定要仔細檢查，以免出錯造成損失 3.常用的程序zui好調用以前使用過的正確程序文件 4.樣品量較小時，zui好在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好
PCR儀使用中的一些小技巧
PCR儀使用中的一些小技巧1.仔細閱讀儀器使用說明書，這樣可以充分發揮儀器的性能并避免發生錯誤2.程序設計完成后，一定要仔細檢查，以免出錯造成損失3.常用的程序最好調用以前使用過的正確程序文件4.樣品量較小時，最好在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好，有利于效果的穩定性5.在
實驗操作技巧和禁忌
常見化學藥品的貯存 硝酸固碘硝酸銀，低溫避光棕色瓶。 液溴氨水易揮發，陰涼保存要密封。 白磷存放需冷水，鉀鈉鈣鋇煤油中， 堿瓶需用橡皮塞，塑鉛存放氟化氫。 易變質藥放時短，易燃易爆避火源。 實驗室中干燥劑，蠟封保存心坦然。 解釋： 1.硝酸固碘硝酸銀，低溫避光棕色瓶：意思是說硝酸
蒸餾操作實驗技巧解析
隔網加熱冷管傾，上緣下緣兩相平。需加碎瓷防暴沸，熱氣冷水逆向行。 解釋： 1、隔網加熱冷管傾："冷管"這冷凝管。意思是說加熱蒸餾燒瓶時要隔石棉網(防止蒸餾燒瓶因受熱不均勻而破裂)，在安裝冷凝管時要向下傾斜。 2、上緣下緣兩相平：意思是說溫度計的水銀球的上緣要恰好與蒸餾瓶支管接口的下緣在同
過濾操作實驗技巧解析
斗架燒杯玻璃棒，濾紙漏斗角一樣。過濾之前要靜置，三靠兩低不要忘。 解釋： 1、斗架燒杯玻璃棒，濾紙漏斗角一樣："斗"指漏斗;"架"指漏斗架。這兩句說明了過濾操作實驗所需要的儀器：漏斗、漏斗架、燒杯、玻璃棒、濾紙、并且強調濾紙折疊的角度要與漏斗的角度一樣(這樣可以是濾紙緊貼在漏斗壁上)。
有關實驗操作技巧解析
固體需匙或紙槽， 手貼標簽再傾倒。 讀數要與切面平， 仰視偏低俯視高。 試紙測液先剪小， 玻棒沾液測最好。 試紙測氣先濕潤，粘在棒上向氣靠。 酒燈加熱用外燃， 三分之二為界限。 硫酸入水攪不停， 慢慢注入防沸濺。 實驗先查氣密性， 隔網加熱杯和瓶。 排水集氣完畢后， 先撤導管后移燈。
萃取操作實驗技巧解析
萃劑原液互不溶，質溶程度不相同。充分振蕩再靜置，下放上倒切分明。 解釋： 1、萃劑原液互不溶，質溶程度不相同：“萃劑”指萃取劑;“質”指溶質。這兩句的意思是說在萃取操作實驗中，選萃取劑的原則是：萃取劑和溶液中的溶劑要互不相溶，溶質在萃取劑和原溶劑中的溶解度要不相同(在萃取劑中的溶解度要大于在