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第一向等電聚焦⒈ 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含IPG buffer）一小管（1ml/管），置室溫溶解。⒉ 在小管中加入0.01g DTT， 0.5% 對應膠條pH范圍的IPG buffer，充分混勻。⒊ 從小管中取出400微升水化上樣緩沖液，加入100微升樣品（考馬斯亮藍染色需樣品1mg，銀染需300μg），充分混勻。⒋ 從冰箱中取-20℃冷凍保存的IPG預制膠條，室溫中放置10分鐘。⒌ 沿著聚焦盤或水化盤中槽的邊緣至左而右線性加入樣品。在槽兩端各1cm左右不要加樣，中間的樣品液一定要連貫。注意：不要產生氣泡。否則影響到膠條中蛋白質的分布。⒍ 當所有的蛋白質樣品都已經加入到聚焦盤或水化盤中后，用鑷子輕輕的去除預制IPG膠條上的保護層。⒎ 分清膠條的正負極，輕輕地將IPG膠條膠面朝下置于聚焦盤或水化盤中樣品溶液上，使得膠條的正極（標有+）對應于聚焦盤的正極。確保膠條與電極緊密接觸。不要使樣品溶......閱讀全文
實驗方法原理雙向電泳（two-dimensional electrophoresis）是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合，即先進行等電聚焦電泳（按照pI分離），然后再進行SDS-PAGE（按照分子大小），經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒ddH2O溴酚藍指示劑
第一向等電聚焦⒈ 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含IPG buffer）一小管（1ml/管），置室溫溶解。⒉ 在小管中加入0.01g DTT， 0.5% 對應膠條pH范圍的IPG buffer，充分混勻。⒊ 從小管中取出400微升水化上樣緩沖液，加入100微升樣品（
實驗材料 細胞樣品 試劑、試劑盒 ddH2O溴酚藍指示劑礦物油丙烯酰胺乙醇MilliQ 水飽和正丁醇SDS瓊脂糖 儀器、耗材 樣品水化盤冰箱厚濾紙搖床電泳槽電泳儀鑷子二向電泳制冷儀手套 實驗步驟 1. ?樣品制備。 2. ?第一向等電聚焦。 3. ?第二向SDS電泳。
水化上樣( 被動上樣)1. 從冰箱中取出 IPG 膠條，室溫放置 10min。2. 沿水化盤槽的邊緣從左向右線性加入樣品，槽兩端各 1cm 左右不加樣，中間的樣品液一定要連貫。注意：不要產生氣泡，否則會影響膠條中蛋白質的分布。3. 用鑷子輕輕撕去 IPG 膠條上的保護層。注意：堿性端較脆弱，應小心操
雙向電泳操作步驟 第一向凝膠 第二向凝膠 組織來源的蛋白質樣品的溶解和制備 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 雙向電泳（two-dimensiona
一、等電聚焦 1. 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室溫溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混勻。 3. 從小管中取出400ml水化上樣緩沖
（一）第一向等電聚焦 1.從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT,不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管）,置室溫溶解. 2.在小管中加入0.01g DTT,Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混勻. 3.從小管中取出400ml水化上樣緩沖液,加入100
（一）第一向等電聚焦? 1. 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室溫溶解。? 2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混勻。? 3. 從小管中取出400ml水化上樣緩沖液，加
（一）第一向等電聚焦 1. 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室溫溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混勻。 3. 從小管中取出400ml水化上樣緩沖液，加入
（一）第一向等電聚焦1. 從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室溫溶解。2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混勻。3. 從小管中取出400ml水化上樣緩沖液，加入100ml樣