核酸是分子生物學的基礎,而核酸提取是整個分子行業繞不過去的門檻,很多時候一份樣本的核酸提取的好壞直接決定了檢測結果的有效性。核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),其中RNA又可以根據功能的不同分為核糖體RNA(rRNA),信使RNA(mRNA)和轉移RNA(tRNA)。DNA主要集中在細胞核內,線粒體和葉綠體中,而RNA主要分布在細胞質當中。核酸中因為嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵,所以核酸具有紫外吸收的特性,DNA鈉鹽的紫外吸收在260nm附近,其吸光率以A260表示,在230nm處于吸收低谷,因此可以使用紫外分光光度計對核酸進行定量及定性測定。核酸為兩性電解質,相當于多元酸,可以使用中性或偏堿性的緩沖液使核酸解離成陰離子,置于電場中向陽極運動,這就是電泳的原理。核酸的化學性質①酸效應:在強酸和高溫,核酸完全水解為堿基,核糖或脫氧核糖和磷酸。在濃度略稀的的無機酸中,最易水解的化學鍵被選擇性的斷裂,一般為連接嘌呤和核糖......閱讀全文
實驗步驟在評價樣品純度之前,首先需要鑒定待測雜質的類型,如核酸、碳水化合物、脂質、無關蛋白質、同工酶類、失活蛋白質,進而確定在特定溶液條件中, 能夠區分假定雜質和目標蛋白質的理化特性 (化學分析或物理特征)。而純度則是指待測雜質含量低于某個特定水平。需要注意的是,上述說明中并沒有要求描述雜質的性質。
蛋白質純度測定實驗 實驗步驟 在評價樣品
在評價樣品純度之前,首先需要鑒定待測雜質的類型,如核酸、碳水化合物、脂質、無關蛋白質、同工酶類、失活蛋白質,進而確定在特定溶液條件中, 能夠區分假定雜質和目標蛋白質的理化特性 (化學分析或物理特征)。而純度則是指待測雜質含量低于某個特定水平。需要注意的是,上述說明中并沒有要求描述雜質的性質。
實驗步驟一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標,既保證較弱的非特異性吸附,又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。
實驗步驟 一、親和介質的選擇 親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標,既保證較弱的非特異性吸附,又可以在整個過