親和層析實驗：常規方法
實驗步驟一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。親和介質可以是商品化的, 或通過適當的化學作用將配基吸附在固相載體上(詳見本章第4節)。下文將詳細討論如何選擇合適的親和介質（GEHealthcare,2007;GustavssonandLarsson，2006;Zachariou，2007), 并對一些需要重點考慮的因素進行總結。1.固相載體材料的基本特征介質顆粒及孔隙應大小一致，且具有良好的流動性能。介質的表面積與孔隙呈負相關，這直接影響固定化配基數量，繼而影響載量。孔隙與排阻限制相關，即一定尺寸范圍或大小(分子質量)的蛋白質不能進入孔隙。大孔不受排阻限制作用的影響，允許大分子無......閱讀全文
親和層析實驗：常規方法
實驗步驟一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。
親和層析實驗：常規方法
實驗步驟 一、親和介質的選擇 親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過
親和層析實驗：常規方法（二）
二、配基的選擇選擇合適的配基，需要對配基和靶分子之間的天然相互作用有一定的認知及理解。靶分子與配基的相互作用必須是特異性結合，并且在不同的結合和洗脫條件下均應該穩定。此外，制訂親和純化的方案時，需著重考慮能否購買到商品化配基，還是需要從頭研制配基和介質。后者的成功在很大程度上取決于對蛋白質結構和相互
親和層析實驗：常規方法（四）
2.配基吸附對于多肽、蛋白質或核酸，通常采用的共價吸附是, 通過胺反應將配基上的氨基吸附在樹脂表面。溴化氰活化表面與伯胺發生反應形成亞胺碳酸鹽是最常見的胺反應吸附。最典型的伯胺是賴氨酸側鏈（Hermanson,1992;PorathetaU1%7)(詳見第 28 章）。這種活化形式的優點在于可以使用
親和層析實驗：常規方法（一）
一、親和介質的選擇親和純化的成功取決于是否選擇了合適的固相載體和配基。理想的親和介質 (如吸附配基的固相載體)應該具備孔隙大、理化性質高度穩定的特征。親和介質可以選擇性的捕獲相應耙標，既保證較弱的非特異性吸附，又可以在整個過程中維持良好的流動特征。優選介質應具備便宜、易獲取和使用簡便的特點。親和介質
親和層析實驗：常規方法（三）
6.仿生配基大部分的親和層析配基是天然存在的，其優點在于具有高度選擇性和強結合能力，但也存在某些缺點。這種配基穩定性低，需要進行純化，使用過程中批間差異大，易被其他生物分子污染，對滅菌方法敏感，并且成本高。為了克服這些局限性，加速親和層析在治療性蛋白質純化中的應用, 仿生型配基 (biomime
親和層析實驗技術方法
INTRODUCTIONThis protocol describes a method for removing antibodies that react with bacterially encoded proteins by passing a crude preparation of im
親和層析實驗
可溶性抗原或膜結合抗原的分離 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
親和層析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 TrisTSA裂解緩沖液脫氧膽酸鈉洗滌緩沖液三乙醇氨緩沖液儀器、耗材 層析柱離心管離心機實驗步驟 1. ?準備一支活化后被淬滅的Sepharose預柱（5 ml 柱床）和一支Ab-Spharose免疫親和層析柱，并將它們串聯起來。2. ?以冰冷TSA溶液重懸50 g 細
實驗動物編號的常規方法
常用的標記法有染色、耳緣剪孔、烙印、號牌等方法。（一）顏料涂染這種標記方法在實驗室最常使用，也很方便。經常應用的涂染化學藥品有：①、涂染紅色：0.5%中性紅或品紅溶液。 ②、涂染黃色：3～5%苦味酸溶液。 ③、黑色：煤焦油的酒精溶液。 ④、涂染咖啡色：2%硝酸銀溶液。標記時用毛筆或棉簽蘸取上述