經歷了天然培養基、合成培養基后,無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。無血清培養基,一般是在合成培養基的基礎上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達到既能滿足動物細胞培養的要求,又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。 無血清培養基中通常需要添加一些額外的組分,才能幫助細胞貼壁生長,包括以下幾大類物質: 1)促貼壁物質:一般為細胞外基質,如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤細胞、粒細胞、腎上皮細胞、腎上腺皮質細胞、CHO細胞、成肌細胞等。 2)促生長因子及激素:針對不同細胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質,有些激素是許多細胞必不可少的,如胰島......閱讀全文
經歷了天然培養基、合成培養基后,無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。無血清培養基,一般是在合成培養基的基礎上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達到既能滿足動物細胞培養的要求,又能有效克服使用血
經歷了天然培養基、合成培養基后,無血清培養基和無血清培養成為當今細胞培養領域的一大趨勢。采用無血清培養可降低生產成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。 無血清培養基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養基。但是它
1.促貼壁物質:許多細胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子,一般為細胞外基質,如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、
1)無蛋白無血清細胞培養基(protein free midium, PFM) 這類培養基完全不含有動物來源蛋白,但仍有部份添加物是植物蛋白的小水解片段或合成多肽片段,以及類固醇激素和脂類前體等,以替代動物激素、生長因子的作用。其特點是完全沒有蛋白或蛋白含量極低,有利于生物制品的分離純化。
無血清培養基和試劑被廣泛的應用于培養哺乳動物和無脊椎動物細胞以制備單克隆抗體,病毒抗原和重組蛋白等。大多數的無血清培養基含有向細胞內轉運離子的轉鐵蛋白和調節葡萄糖攝取量的胰島素,以及一些蛋白質和清蛋白,纖維蛋白,胎球蛋白等,這些蛋白在細胞培養中發揮各種不同的功能,如提供細胞貼壁所需的基質,抗生物反應
1.促貼壁物質:許多細胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養基中一定要添加促貼壁和擴展因子,一般為細胞外基質,如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子,對許多細胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,這些細胞包括成纖維細胞、肉瘤
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。 物理介導方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍; 化學介導方法:如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術; 生物介導方法:有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。 理想細胞轉染方法,應該具有轉染效
無血清培養基優點1.可避免血清批次間的質量變動,提高細胞培養和實驗結果的重復性。2.避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。3.避免血清組分對實驗研究的影響。4.有利于體外培養細胞的分化。5.可提高產品的表達水平并使細胞產品易于純化。缺點:1.細胞在無血清培養基中易受某些機械因素和化學因素的影響,培
1.可避免血清批次間的質量變動,提高細胞培養和實驗結果的重復性。 2.避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。 3.避免血清組分對實驗研究的影響。 4.有利于體外培養細胞的分化。 5.可提高產品的表達水平并使細胞產品易于純化。 缺點: 1.細胞在無血清培養基中易受某些機械因素和化學因
1.直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中。 一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應,接種細胞密度應該:2.5×10~3.5×10細胞/ml。當細胞密度達到1×10~3×10細胞/ml時,傳代培養細胞。當細胞密度在培養4到7天后達到2×10