跑膠蛋白質彌散
estern Blot(WB)可以說是生物學方向的同學最...最基本的實驗技能了,然而好看的 WB 總是別人的,自己的 WB 總是雜帶叢生,尤其是新課題、新抗體,總在目的條帶附近出現非特異性條帶。產生這種狀況的原因是什么呢、用下面的幾個例子,咱們一起研究一下。 案例一:啥也沒有 原因:比較多,如果單純一張沒有任何顯色的X光片,最可能是一抗加成其他抗體,或者二抗種屬加錯了,比如兔的加成鼠的。 解決辦法:仔細檢查抗體是否加錯,確認轉膜沒有問題。 經驗:上面的圖片展示的是一點信號都沒有,如果是這樣大部分情況是抗體加錯了。如果中間出現了細微的條帶,可能原因是蛋白上樣量太少,一抗濃度過低,ECL發光液失效。另外如果轉膜出現了問題,比如膜放反了,自然是一個白片。 案例二:高背景 原因:封閉不夠好,一抗濃度高,洗膜時間和次數不夠 解決辦法:降低一抗濃度,增加洗膜時間和次數。 經驗:高背景可能是WB中最常見出現的問題,目的條......閱讀全文
跑膠蛋白質彌散
estern Blot(WB)可以說是生物學方向的同學最...最基本的實驗技能了,然而好看的 WB 總是別人的,自己的 WB 總是雜帶叢生,尤其是新課題、新抗體,總在目的條帶附近出現非特異性條帶。產生這種狀況的原因是什么呢、用下面的幾個例子,咱們一起研究一下。 案例一:啥也沒有 原因:比較多
跑膠蛋白質彌散
estern Blot(WB)可以說是生物學方向的同學最...最基本的實驗技能了,然而好看的 WB 總是別人的,自己的 WB 總是雜帶叢生,尤其是新課題、新抗體,總在目的條帶附近出現非特異性條帶。產生這種狀況的原因是什么呢、用下面的幾個例子,咱們一起研究一下。 案例一:啥也
跑膠蛋白質彌散
estern Blot(WB)可以說是生物學方向的同學最...最基本的實驗技能了,然而好看的 WB 總是別人的,自己的 WB 總是雜帶叢生,尤其是新課題、新抗體,總在目的條帶附近出現非特異性條帶。產生這種狀況的原因是什么呢、用下面的幾個例子,咱們一起研究一下。 案例一:啥也沒有 原因:比較多
電泳后跑膠跑多久
2%的瓊脂糖凝膠電泳跑多少時間合適 看染料的位置就好了, 怕時間太短你可以放回去繼續跑嘛
什么是cDNA跑膠
生物實驗中的“跑膠”是指跑電泳。 跑電泳就是用瓊脂糖凝膠制作膠板從而讓樣品在膠板上產生電泳,所以簡稱“跑膠” 分子生物學中的跑膠會出現條帶,是因為帶電荷的生物大分子在電泳池里的運動速度決定于該分子的分子量,所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成條帶,進而實現了分離純化生物大分子的目的。
DNA跑膠具體步驟
制膠、設置電泳系統(緩沖液、電源、電泳槽等)、DNA樣品準備(DNA及DNA Marker+上樣緩沖液)、加樣、電泳、染色、UV檢測分析等。
DNA跑膠具體步驟
制膠、設置電泳系統(緩沖液、電源、電泳槽等)、DNA樣品準備(DNA及DNA Marker+上樣緩沖液)、加樣、電泳、染色、UV檢測分析等。
如何理解PCR跑膠圖
圖分為兩部分:最左邊亮度階梯分布,不同高度代表PCR片段長度的不同,片段越短,跑的越快,為最下方的條帶。片段越長,跑的越慢,為最上方的條帶。最左邊為一個參考條帶;右邊是實際PCR出的片段分布,跑膠(以肉眼可見的方式顯示PCR片段長短的分布)的作用主要有兩個:作用一: 質控,如果出現明顯的拖尾,代表P
電泳跑膠電壓和時間
sds-page跑電泳時,跑到濃縮膠和分離膠分界處時一般是要換電壓的。具體是40變60還是80變120要根據實際試驗的時間來確定,而且這個時間的要求不會很嚴格,也就是說對電壓的要求不嚴。我做這個試驗時,師姐給我講的是由80變到120~140即可
跑蛋白膠膠的濃度根據什么定的
這個要看你蛋白大小的,個人習慣:蛋白如果100kD以上的話用8%,100-60用10%,60-40用12%,40-10用15%,分子克隆上面有的,每個濃度大概跑什么大小的蛋白質。
pcr跑膠結果出現拖尾、彌散說明什么
可能是產物降解,也可能引物、模版的量上的比較大。適當減少循環,調整引物、模版的量
為什么PCR跑不出來,都彌散了
彌散的原因比較多:1、PCR產物是否在擴增結束后立即進行電泳,電泳液是否是新鮮的,如果不是很可能導致擴增產物降解。2、PCR體系沒摸索出來,用正交試驗找出正確的PCR體系,不要單純根據別人的試驗資料去做,不要太相信文章中的數據,誰都會保護自己的試驗結果和數據的。3、擴增所用的引物設計的不好,找別人幫
質粒pcr跑膠如何看結果
一般空載擴出片段較小,插入片段的質粒擴增片段較大,具體看載體及插入片段大小來判斷是否為陽性克隆,及是否為目標片段。
質粒pcr跑膠如何看結果
一般空載擴出片段較小,插入片段的質粒擴增片段較大,具體看載體及插入片段大小來判斷是否為陽性克隆,及是否為目標片段。
跑western時不同濃度的分離膠對跑蛋白的影響
如果膠濃度不同,蛋白在其中遷移的速率就不一樣,所以如果采用裁膜的方式,對于蛋白遷移的位置要事先有個預判。10%的膠,濃度高,遷移慢一些,如果都在相同位置裁,這里看到條帶,6,8%的膠,膜需要裁得更靠下緣。或者把之前裁掉的膜的下半部分再拿來做做實驗試試。當然,電泳時的各種因素也會有影響,但是如果其他配
跑western時不同濃度的分離膠對跑蛋白的影響
如果膠濃度不同,蛋白在其中遷移的速率就不一樣,所以如果采用裁膜的方式,對于蛋白遷移的位置要事先有個預判。10%的膠,濃度高,遷移慢一些,如果都在相同位置裁,這里看到條帶,6,8%的膠,膜需要裁得更靠下緣。或者把之前裁掉的膜的下半部分再拿來做做實驗試試。當然,電泳時的各種因素也會有影響,但是如果其他配
電泳跑膠SDSPAGE的定義
SDS-PAGE即聚丙烯酰氨凝膠電泳詳細資料如下:聚丙烯酰胺凝膠電泳是網狀結構,具有分子篩效應,它有兩種形式,一種是非變性聚丙烯酰胺凝膠,蛋白質在電泳中保持完整的狀態,蛋白在其中依三種因素分開:蛋白大小,形狀和電荷。而SDS-PAGE僅根據蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白。這個技術首先是1967年由s
電泳跑膠SDSPAGE的定義
聚丙烯酰胺凝膠電泳是網狀結構,具有分子篩效應,它有兩種形式,一種是非變性聚丙烯酰胺凝膠,蛋白質在電泳中保持完整的狀態,蛋白在其中依三種因素分開:蛋白大小,形狀和電荷。而SDS-PAGE僅根據蛋白分子量亞基的不同而分離蛋白。這個技術首先是1967年由shapiro建立,他們發現在樣品介質和丙烯酰胺凝膠
蛋白質電泳所加樣品在濃縮膠中跑的不成一條直線
首先得確認你配置膠的濃度以及配膠的試劑沒問題,如果濃度沒問題的話,應該是膠板下面(原先圈著的膠條位置)存有氣泡沒有趕跑,把氣泡用吸管趕走后就OK了之前我也碰到過類似情況
跑膠的maker最少可以加多少
跑膠的maker最少可以加5微升。瓊脂糖凝膠制作膠板從而讓樣品在膠板上產生電泳,簡稱“跑膠”。分子生物學中的跑膠會出現條帶,是因為帶電荷的生物大分子在電泳池里的運動速度決定于該分子的分子量,所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成條帶,進而實現了分離純化生物大分子的目的。Maker跑出來的每條條帶
跑膠時二聚體為什么很亮
在我印象里我們實驗室PCR沒出現過這種情況,也沒有人專門研究這種情況,文章估計就更沒有了=.=我提一點我自己的看法吧.你們做過沒做過對照試驗?如果沒有的話建議做兩個對照試驗:一是PCR體系里加模板和酶,不加引物;二是PCR體系里加引物和酶,不加模板.這兩個和正常實驗組一起P一起跑膠,然后對照著看一下
生物實驗中的”跑膠”是什么意思
瓊脂糖凝膠制作膠板從而讓樣品在膠板上產生電泳,簡稱“跑膠”。分子生物學中的跑膠會出現條帶,是因為帶電荷的生物大分子在電泳池里的運動速度決定于該分子的分子量,所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成條帶,進而實現了分離純化生物大分子的目的。
生物實驗中的”跑膠”是什么意思
瓊脂糖凝膠制作膠板從而讓樣品在膠板上產生電泳,簡稱“跑膠”。分子生物學中的跑膠會出現條帶,是因為帶電荷的生物大分子在電泳池里的運動速度決定于該分子的分子量,所以相同分子量的生物大分子就聚集在一起形成條帶,進而實現了分離純化生物大分子的目的。
蛋白樣品在跑膠前要如何處理
一.蛋白樣品制備 之前和大家介紹過細胞和組織蛋白質的提取,當我們做WB的時候,需要對提取好的蛋白樣品進行處理:在蛋白樣品中加入SDS loading buffer 6X(蛋白上樣緩沖液)稀釋至1X(如蛋白樣品有120ul,則加入SDS loading buffer 6X 600ul),混勻,7
WB跑膠后沒有條帶是什么原因
提取細胞蛋白加1ml裂解液實在是有點多,你可以減少到200-300ul試試,提取蛋白后做個BCA蛋白定量,在做后續的考藍染色,確定蛋白沒有問題再電泳轉膜
RNA電泳跑膠為什么沒有5S條帶
生物體內一般含有核糖體rna(rrna)、信使rna(mrna)、轉運rna(trna)三種主要的rna,其中rrna含量最多,提取組織總rna所得最多的就是rrna。真核生物中含有5s、5.8s、18s、28s,原核生物中有5s、16s、23s;而植物組織中一般較多的為5s、18s、28ss代表沉
PCR純化,跑膠沒有出現條帶,是什么原因
你要確定你PCR有沒有擴增出條帶,先用檢測膠點了看一下。如果檢測膠可以看到條帶,回收膠看不到的話,可能是你PCR的產物的量太少了,回收膠膠孔寬,PCR結果不好的條帶可能就看不到了。如果你確定你的PCR的產物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,1.跑膠用的TAE/TBE是不是1X的,你點膠的時候P
PCR純化,跑膠沒有出現條帶,是什么原因
你要確定你PCR有沒有擴增出條帶,先用檢測膠點了看一下。如果檢測膠可以看到條帶,回收膠看不到的話,可能是你PCR的產物的量太少了,回收膠膠孔寬,PCR結果不好的條帶可能就看不到了。如果你確定你的PCR的產物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,跑膠用的TAE/TBE是不是1X的,你點膠的時候PCR
PCR純化,跑膠沒有出現條帶,是什么原因
你要確定你PCR有沒有擴增出條帶,先用檢測膠點了看一下。如果檢測膠可以看到條帶,回收膠看不到的話,可能是你PCR的產物的量太少了,回收膠膠孔寬,PCR結果不好的條帶可能就看不到了。如果你確定你的PCR的產物是有的,明亮的,但是跑回收看不到,那么,跑膠用的TAE/TBE是不是1X的,你點膠的時候PCR
提取的總RNA跑膠從大到小有幾條帶
提取的總RNA跑膠從大到小有帶3條。三條是主帶。哺乳動物的RNA包括mRNA,rRNA,tRNA和du小RNA,根據分子量和沉降系數的不同,rRNA又可分為28s, 18s 和5.8s 的rRNA。從RNA的含量上看,rRNA是幾種RNA中最多的,高達90%以上,而mRNA很少,只有1-2%,而其他