CRISPR／Cas9條件性基因敲入鼠的鑒定方法
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRISPR/Cas9條件性基因敲除鼠的鑒定，今天我們就開始學習CRISPR/Cas9條件性基因敲入鼠的鑒定。 驗證F1代flox鼠打靶是否正確 01 引物設計F1/R1驗證5'arm打靶是否正確，F2/R2驗證3'arm打靶是否正確，F4/R4驗證插入區域。鑒定的陽性鼠繼續進行Southern Blot的驗證。 02 預期片段大小條帶1的大小為：F1/R1擴增的5'arm端，包括野生型骨架區+同源臂+loxP+敲入區域；條帶2的大小為：F2/R2擴增的3'arm端，包括野生型骨架區+同源臂+loxP+敲入區域；條帶3的大小為：F4/R4......閱讀全文
CRISPR/Cas9條件性基因敲入鼠的鑒定方法
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRISPR/Cas9條件性基因敲除鼠的鑒定，今天我們就開始學習CRISPR/
CRISPR/Cas9基因敲入鼠鑒定方法之Southern－Blot與PCR
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRISPR/Cas9條件性基因敲入鼠的鑒定，今天我們就開始學習CRISPR/C
CRISPR/Cas9條件性基因敲除鼠的鑒定手法
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鑒定，今天我們就開始學習CRISPR/
CRISPR/Cas9完全性基因敲除鼠的鑒定方法
基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳比對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了PCR膠濃度、電泳電壓及時間的選擇，今天我們就開始學習CRISPR/Cas9完
全新CRISPR/Cas9基因敲入系統助力肝癌建模
最近發表在開放獲取期刊《基因組醫學》（Genome Medicine）上的一項研究，報道了一種建立肝癌小鼠模型的新方法，即利用CRISPR/Cas9系統快速將癌癥相關基因敲入小鼠的DNA中。 研究的通訊作者、麻省大學醫學院RNA療法研究所的王文說：“為了更好地理解腫瘤生物學、開展臨床前研究以及
CRISPR新改良實現高效基因敲入
細菌一直在與病毒或入侵核酸進行斗爭，為此它們演化出了多種防御機制，CRISPR/Cas適應性免疫系統就是其中之一。該系統能在小RNA分子（crRNA）的引導下，靶標并沉默入侵者的遺傳物質。 發現CRISPR系統之后不久，人們就開始用它來進行特異性的基因編輯。這種基因編輯技術更容易操
新技術推動CRISPR、TALEN廣泛介導基因敲入
使用一種新型的基因敲入（knock-in）技術，來自日本的科學家們將外源基因有效地插入到了人類細胞和包括蠶及青蛙在內的動物模型中。這種策略不僅能夠在培養細胞中，還可以在各種生物體中普遍實現基因敲入。相關研究結果發布在近日的《自然通訊》（Nature Communications）雜志上。 當前
各種類型的基因編輯鼠如何建系？
《鼠年說鼠》系列文章，每周二更新，專門解答大小鼠鏟屎官們在養鼠過程中經常遇到的繁育與鑒定類的問題，同時向大家征集問題，任何基因編輯鼠飼養繁殖或鑒定的困惑統統可以丟給小賽，小賽會給您回復或統一在后面的內容為大家做出詳細的解答。今天我們就開始第九期的內容吧～??完全性基因敲除、基因敲入（點突變）鼠如何建
基因敲入的概念
基因敲入（gene knock in）是利用基因同源重組，將外源有功能基因（基因組原先不存在、或已失活的基因），轉入細胞與基因組中的同源序列進行同源重組，插入到基因組中，在細胞內獲得表達的技術。基因敲入有兩種，一種是原位敲入,即在原基因敲除的位點插入新基因,它是基因敲除的逆過程；另一種是定點敲入,即
如何鑒定CRISPR/Cas9點突變小鼠轉基因鼠以及ES打靶技術...
如何鑒定CRISPR/Cas9點突變小鼠轉基因鼠以及ES打靶技術構建鼠？?基因工程小鼠基因型PCR鑒定的基本原則是利用基因工程小鼠基因組與野生型小鼠基因組的序列差異，以小鼠基因組DNA為模板進行PCR，并以凝膠電泳對比不同基因型特異產物的大小，根據條帶大小來區分小鼠的不同基因型。上期我們講述了CRI
Nature子刊：TALEN/CRISPR介導的新型替代基因敲入技術
來自廣島大學的專任講師Tetsushi Sakuma、Takashi Yamamoto教授，專任副教授Ken-Ichi T Suzuki及同事們在《Nature Protocols》雜志上，報告了一種利用基因組編輯技術的替代基因敲入方法的精簡實驗方案。這一創新方法被稱作為PITCh系統（精確整合
TetraOne－KO——基因敲除技術進展
TetraOne KO——基因敲除技術的重大突破 近日，賽業生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技術TetraOne基因敲除，一種不僅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6個月），而且避免了TALEN、CRISP
CRISPR/Cas9和ES打靶選擇的優劣比較
?近年隨著生物醫藥技術快速迭代，靶向藥物、免疫療法、基因治療等個性化治療方式成為生物藥創新的主要方向，這其中離不開基因編輯技術的發展。從一年前的ZL之爭，到基因編輯公司Editas人類基因編輯的臨床試驗獲FDA批準可知，基因編輯技術的發展備受期待。?目前動物模型基因編輯技術大抵分為兩類：ES細胞打靶
TetraOne－KO——基因敲除技術的重大突破
近日，賽業生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技術TetraOne基因敲除，一種不僅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6個月），而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脫靶效應困擾的革命性技術。TetraO
TetraOne－KO——基因敲除技術的重大突破
TetraOne KO——基因敲除技術的重大突破 近日，賽業生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球ZL技術TetraOne基因敲除，一種不僅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6個月），而且避免了TALEN、
Cas9CKI小鼠繁育原則與路線講解
隨著基因工程技術的發展，針對特定基因研究的小鼠模型構建也越來越成熟。但是，構建成功的模型小鼠要用于實驗，還需要漫長的繁育之路要走。行百里者半九十，你以為模型構建成功了就結束了嗎？NO NO NO！繁育是提供合格實驗材料過程中的臨門一腳。特別是對于CKO、CKI這些組織特異性的模型小鼠，需要與cre工
上海生科院利用雙生病毒載體系統實現CRISPR/Cas9
3月19日，《分子植物》（Molecular Plant）雜志在線發表了中國科學院上海生命科學研究院植物逆境生物學研究中心朱健康研究組題為Gene targeting by homology-directed repair in rice using a geminivirus-based CR
科學家在植物中實現超長基因片段高效精準無贅敲入
5月17日，國際學術期刊《自然-通訊》（Nature Communications）在線發表了中國科學院上海植物逆境生物學研究中心朱健康研究組題為CRISPR/Cas9-mediated gene targeting in Arabidopsis using sequential transfo
Cell子刊介紹一種高效精確的基因敲入技術：TildCRISPR
一組研究人員設計了一種新型基因靶向整合策略Tild-CRISPR，它可以在小鼠和人的細胞中實現高效精確的基因敲入。Tild-CRISPR不僅適用于高效地構建小鼠動物模型，同時為研究體內的基因功能以及開發潛在的基因療法提供新思路。 這一研究成果公布在Developmental Cell期刊上，題
將致癌基因敲入小鼠DNA中－“基因魔剪”讓癌癥建模更準確
據開放獲取期刊《基因組醫學》16日公開的一項研究，美國科學家報告了一種建立癌癥小鼠模型的新方法——利用有“基因魔剪”之稱的CRISPR/Cas9系統快速將癌癥相關基因敲入小鼠的DNA中。該方法以前所未有的高效，滿足了快速準確建立動物模型的需求。 研究通訊作者、麻省大學醫學院RNA療法研究所的
基因敲入的概念和基本方式
基因敲入（gene knock in）是利用基因同源重組，將外源有功能基因（基因組原先不存在、或已失活的基因），轉入細胞與基因組中的同源序列進行同源重組，插入到基因組中，在細胞內獲得表達的技術。?基因敲入有兩種，一種是原位敲入,即在原基因敲除的位點插入新基因,它是基因敲除的逆過程；另一種是定點敲入,
基因敲入的定義和方式介紹
基因敲入（gene knock in）是利用基因同源重組，將外源有功能基因（基因組原先不存在、或已失活的基因），轉入細胞與基因組中的同源序列進行同源重組，插入到基因組中，在細胞內獲得表達的技術。基因敲入有兩種，一種是原位敲入,即在原基因敲除的位點插入新基因,它是基因敲除的逆過程；另一種是定點敲入,即
中國農大特聘教授發表CRISPR文章
2015年12月10日，中國農業大學特聘教授韓建永帶領的研究小組，以Letter的形式在《Protein & Cell》雜志上發表題為“Highly efficient generation of biallelic reporter gene knock-in mice via CRISPR-
中國農大特聘教授發表CRISPR文章
2015年12月10日，中國農業大學特聘教授韓建永帶領的研究小組，以Letter的形式在《Protein & Cell》雜志上發表題為“Highly efficient generation of biallelic reporter gene knock-in mice via CRISPR-
全新CRISPR/Cas9基因編輯系統助力肝癌建模
最近發表在開放獲取期刊《Genome Medicine》上的一項研究，報道了一種建立肝癌小鼠模型的新方法，即利用CRISPR/Cas9系統快速將癌癥相關基因敲入小鼠的DNA中。 研究的通訊作者、麻省大學醫學院RNA療法研究所的王文說：“為了更好地理解腫瘤生物學、開展臨床前研究以及為病人找到潛在
新型高效精確的基因靶向整合策略研究獲進展
近日，中國科學院腦科學與智能技術卓越創新中心/神經科學研究所研究員楊輝研究組與山東大學附屬生殖醫院、上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院教授陳子江課題組合作，設計了一種新型基因靶向整合策略Tild-CRISPR，它可以在小鼠和人的細胞中實現高效精確的基因敲入，不僅適用于高效地構建小鼠動物模型，同時也為
李曉江博士：探討用CRISPR/Cas9實現大型動物基因組編輯
6月2日，來自中國科學院遺傳與發育生物學研究所的李曉江（Xiao-Jiang Li）研究員在《細胞研究》（Cell Research）雜志上發表了題為“Targeted genome editing in primate embryos”的文章。 在這篇文章中他概述了近期在靈長類動物胚胎中應用
基因編輯到底是什么
嗨~來看點更專業的回答吧 ?(?ω?)?CRISPR/Cas基因編輯系統? ? ???CRISPR/Cas（Clustered?Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas）系統是目前被廣泛運用的基因編輯系統，其原理是由CRISPR轉錄產生的
－Cell子刊突破：無需克隆的CRISPR新技術
來自荷蘭Hubrecht研究所和烏特勒支醫學中心（UMC Utrecht）、麻省理工學院的研究人員稱，他們開發出了一種自身克隆CRISPR/Cas9(scCRISPR)技術，可以繞開基因編輯過程中所有的克隆步驟，在數小時內完成CRISPR/Cas9介導基因突變及位點特異性轉基因敲入。他們的研究成
基因編輯到底是什么
? ? ? ?CRISPR/Cas9系統中sgRNA(smallguideRNA)識別并結合目標基因的靶向序列，引導Cas9對結合位點進行剪切，產生DNA雙鏈斷裂（double-strandbreak,DSB），機體自身通過非同源重組（non-homologousendjoining，NHEJ）的方