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    蛋白質多肽Iodogen碘化法

    1.原理 用Iodogen為氧化劑,對蛋白質和多肽抗原進行碘化標記,把125I直接引進分子中的酪氨酸殘基上。標記過程中被標記樣品不與Iodogen混合,標記后取出樣品即停止反應,不使用任何還原劑。 2.方法 (1)標記之前,先把Iodogen溶于有機溶劑,涂于管底,并使之干燥。 (2)標記時,將蛋白質溶液10~20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于反應管中,反應管置于冰浴中。碘化時,125I與蛋白質克分子之比例為1~1.2。反應時間在溫和的連續的攪拌下可達10min,從反應管中轉移出反應混合液,使其反應停止。反應液轉移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中,層析分離前再放置5min,使其未標記的碘離子還原成分子碘,以避免在帶有緩沖液的柱中使白蛋白碘化。 3.注意事項 (1)涂有Iodogen的反應管,有氮氣中密封,并貯存在-20℃條件下,至少......閱讀全文

    放射性碘標記

    在RIA中,標記抗原質量的優劣,直接影響測定結果,必須制備比放射性強、純度高的標記抗原,并保持免疫活性不受喪失。  一、同位素的選擇  同位素有穩定性和放射性兩種。放射性同位素可利用其衰變時放出的放射線進行測量,這種測量較靈敏而方便,故多用放射性同位素。標記抗原,常用的放射性同位素有3H、14C、1

    蛋白質與多肽激素的放射免疫分析-2

    (二)乳過氧化物酶法(LPO)  本法反應溫和,對抗原、抗體免疫活性影響小,已被廣泛應用。缺點是標記率較低,一般為20~40%。  1.原理此法是利用乳過氧化物酶(Lactoperoxidase)有促進微量過氧化氫對125I-的氧化作用,生成125I+,并標記在多肽、蛋白質酪氨酸分子上。  2.方法

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