哺乳動物細胞總RNA的分離
哺乳動物細胞總ＲＮＡ的分離細胞的裂解提取步驟注意事項 這一從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序系為Favaloro 等（1980）所介紹程序的改良。該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這種裂解細胞的方法（在SDS存在的條件下用蛋白酶K消化）去消化組織速度很慢，導致內源性RNA酶在被蛋白酶K消化或被抑制劑滅活前有時間發揮作用。原方案中（Favaloro等。1980）采用的裂解緩沖液含有0.015 ％（W/V）的Macaloid（硅藻土），用于吸附并滅活RNA酶。盡管現仍有Macaloid出售NL Chemicals）， 但氧釩核糖核苷復合物和RNA酶的蛋白質抑制劑更常用。下述程序的優點是速度快，并能同時處理很多樣品。一細胞的裂解單層細胞的裂解懸浮培養的細胞或組織單細胞懸液的裂解a．單層細胞的裂解a）吸出培養液，以7ml用冰預......閱讀全文
哺乳動物細胞總RNA的分離
哺乳動物細胞總ＲＮＡ的分離細胞的裂解提取步驟注意事項 這一從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序系為Favaloro 等（1980）所介紹程序的改良。該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這種裂解
哺乳動物細胞總RNA的分離
實驗概要本實驗介紹了從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序，該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這種裂解細胞的方法（在SDS存在的條件下用蛋白酶K消化)去消化組織速度很慢，導致內源性RNA酶在被蛋
哺乳動物細胞總RNA快速分離
試劑、試劑盒 尤鈣鎂離子磷酸緩沖鹽溶液 EDTASDS 乙酸鈉水平衡的苯酚 乙醇 Tris-Cl NaCL 實驗步驟 一 材料與設備 1)尤鈣鎂離子磷酸緩沖鹽溶液 (PBS) ? ?? 2)10 mmol/L ?EDTA (pH8.0 ) ? ?? 3)0.5% SDS ?
哺乳動物細胞總RNA快速分離
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 尤鈣鎂離子磷酸緩沖鹽溶液 EDTA SDS 乙酸鈉 水平衡的苯酚 ?乙醇 Tris-Cl ?NaCL
2.1.2 哺乳動物細胞總RNA快速分離
利用 SDS 裂解細胞 ，并用酸性苯酚分級提取細胞總 RNA, 這是一種適合于處理 mRNA 含量相對較低、內源性 RNase 活性較髙的細胞的方法，該方法 RNA 損失極少，簡便易行 ，可同時處理多個樣品。對大多數細胞株來說，在一個直徑 90mm 培養皿中培養細胞 ，其 RNA 收率為 100?2
哺乳動物細胞(mammalian cell)總RNA的分離-2
3）于0℃以5000g離心10分鐘沉淀RNA，棄上清，用含0.1mol/L 乙酸鈉（pH5.2）的70％乙酸洗滌沉淀，用自動微量移液器盡可能將乙醇吸盡， 隨后于室溫放置幾分鐘，晾干沉淀。切勿抽干沉淀，因為干的核酸沉淀很難溶解。4）每個直徑為90mm的培養皿或每107細胞加 200μl 50mmol/
哺乳動物細胞(mammalian cell)總RNA的分離-1
哺乳動物細胞總ＲＮＡ的分離細胞的裂解提取步驟注意事項這一從培養的單層哺乳動物細胞中分離RNA的實驗程序系為Favaloro 等（1980）所介紹程序的改良。該程序同樣適用于從懸浮培養的哺乳動物細胞中或從易于分散成單個細胞的哺乳動物組織中分離 RNA。但不適用于從固體組織中提取RNA，因為用這
哺乳動物細胞胞質RNA的分離
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 冰冷的磷酸鹽緩沖液 NaCl KCl Na2HP04?7H20 KH2PO4 冰冷的裂解緩沖液：
哺乳動物細胞胞質RNA的分離
試劑、試劑盒 冰冷的磷酸鹽緩沖液 NaClKCl Na2HP04?7H20 KH2PO4 冰冷的裂解緩沖液： LTris-HCl NaCl MgCL2 NkmidetP-40 胎盤 RNase 抑制劑 SDS 蛋白酶 K 酚 氯 仿 異戊醇 乙酸鈉 (DEPC 處理） 無水乙醇 乙醇 乙酸鈉
2.1.3 哺乳動物細胞胞質RNA的分離
下述方法是純化組織培養細胞胞質 RNA 的 簡便并行之冇效的方法 ，此方法出現在 RNA 分離的較早階段，主要步驟即離心去除細胞核試劑、試劑盒冰冷的磷酸鹽緩沖液NaClKClNa2HP04?7H20KH2PO4冰冷的裂解緩沖液： LTris-HClNaClMgCL2NkmidetP-40胎盤RNas