iRNA干擾GFP表達實驗
【原理】RNA沉默是發生在植物（轉錄后基因沉默或共抑制）、動物（RNA干擾，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物細胞中的的特異性和高效率的mRNA降解機制。在哺乳動物細胞中，RNAi通常用于阻斷特定基因的表達從而研究基因的功能。將靶向特定基因的大約21堿基長短的雙鏈siRNAs(smallinterferingRNAs)，或者是45—50-mer的發夾結構RNA（smallhairpinRNA,shRNA）轉染到細胞。shRNA在細胞內會自動被加工成為siRNA，從而引發基因沉默或者表達抑制。通過質粒表達siRNAs同樣可以抑制特定基因的表達。選用PolIII啟動子啟動編碼shRNA(smallhairpinRNA)的序列。PolIII啟動子總是在離啟動子一個固定距離的位置開始轉錄合成RNA，遇到4—5個連續的U即終止，非常精確。當這種帶有PolIII啟動子和shRNA編碼序列的質粒轉染哺乳動物細胞時，這種能表達siRNA的質......閱讀全文
iRNA干擾GFP表達實驗
實驗概要本文介紹了iRNA干擾GFP表達實驗的原理及方法步驟。實驗原理RNA沉默是發生在植物（轉錄后基因沉默或共抑制）、動物（RNA干擾，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物細胞中的的特異性和高效率的mRNA降解機制。在哺乳動物細胞中，RNAi通常用于阻斷特定基因的表達從而研究基因的功能。將靶向特
iRNA干擾GFP表達實驗
【原理】RNA沉默是發生在植物（轉錄后基因沉默或共抑制）、動物（RNA干擾，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物細胞中的的特異性和高效率的mRNA降解機制。在哺乳動物細胞中，RNAi通常用于阻斷特定基因的表達從而研究基因的功能。將靶向特定基因的大約21堿基長短的雙鏈siRNAs(smallinte
亞細胞定位的GFP融合蛋白表達法
GFP是綠色熒光蛋白，在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會發出綠色熒光，從而可以精確地定位蛋白質的位置。綠色螢光蛋白（GFP）是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。通過基因工程技術，綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉進不同物種的基因組，在后代中持續表達，并且能根
基因槍轟擊洋蔥表皮觀察GFP瞬時表達
實驗試劑高滲培養液(MS無機鹽、40g/L甘露醇)，高滲固體培養基(MS無機鹽、40g/L甘露醇、0.7% agar)，無水乙醇，無菌去離子水，12.5 M CaCl2 ，0.1 M亞精胺，等滲培養基(MS培養基)實驗設備高速離心機，1.5 ml Ep管，渦旋器，超凈臺，基因槍，氣瓶，激光共聚焦顯微
基因槍轟擊洋蔥表皮觀察GFP瞬時表達
實驗概要本實驗在構建了OsAGAP瞬時表達載體的基礎上，采用基因槍轟擊洋蔥表皮觀察了GFP的瞬時表達。主要試劑高滲培養液(MS無機鹽、40g/L甘露醇)，高滲固體培養基(MS無機鹽、40g/L甘露醇、0.7% agar)，無水乙醇，無菌去離子水，12.5 M CaCl2，0.1 M亞精胺，等滲培養基
真核表達載體pcDNA3.1GFP的構建
【原理】引物中設計入限制酶位點：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互補堿基，因此可以在兩引物的5'末端設計單限制酶或雙限制酶切位點。這樣得到的PCR產物用限制酶消化產生粘性末端，即可與有互補粘端的載體DNA重組。這種克隆方法效率較高，且當兩引物中設計不同酶切位點時，可有效地定向克
GFP抗體|GFP抗體檢測GFP、EGFP、YFP、EYFP、CFP抗體
檢測GFP、EGFP、YFP、EYFP、CFP的GFP抗體GFP是綠色螢光蛋白（Green Fluorescent Protein）的簡稱，由238個氨基酸殘基組成。GFP蛋白質最早是由下村脩等人在1962年在一種學名Aequorea victoria的水母中發現。其基因所產生的蛋白質，在藍色波長范
GFP在大腸桿菌中的誘導表達及超聲破碎抽提
實驗概要本實驗介紹了GFP在大腸桿菌中的誘導表達和細菌蛋白的超聲破碎抽提原理及操作步驟等。實驗原理把含有外源基因的表達載體轉化的大腸桿菌在有相應抗菌素和誘導物的條件下培養，可以誘導外源蛋白在大腸桿菌中表達。利用溶菌酶、反復凍融或超聲波破碎的方法將誘導培養的細菌的細胞壁破碎后，可使那些可溶性的外源蛋白
過表達質粒與RNA干擾質粒有什么不同
本質上是一樣的，都是讓外源性的基因序列在細胞內得到表達。但是由于目的不同，技術細節上也會有不同。過表達的質粒如果是一過性表達，不需要整合到細胞染色體組，只要有強的啟動子就可以了。穩定表達的，需要有篩選基因的表達來選出整合的細胞。而干擾質粒一般都需要是穩定的表達，現在都是通過慢病毒來實現，質粒基本都棄
核糖核酸干擾可控制癌癥活躍基因的表達
加拿大麥吉爾大學生物化學系研究人員發現，與核糖核酸相結合的一種蛋白質片斷能夠控制基因的正常表達，其中包括那些在癌癥中活躍的基因。專家認為，這是癌癥研究工作的一項重要突破，可立即將其應用到實驗室的研究工作中，并且使目前各國科學家廣泛開展的癌癥個性化治療工作向前推進了一大步。相關研究成
GFP在大腸桿菌中的誘導表達和細菌蛋白的超聲破碎抽提
[實驗原理] 把含有外源基因的表達載體轉化的大腸桿菌在有相應抗菌素和誘導物的條件下培養，可以誘導外源蛋白在大腸桿菌中表達。利用溶菌酶、反復凍融或超聲波破碎的方法將誘導培養的細菌的細胞壁破碎后，可使那些可溶性的外源蛋白釋放出來，再利用硫酸銨沉淀、蛋白質層析技術和制備電泳等方法能夠將外源
GFP單抗的概述
GFP單抗，又叫GFP單克隆抗體，或維多利亞水母綠色熒光蛋白單抗，是蛋白質研究過程中非常重要的工具，尤其是在鑒定重組的帶有GFP標簽的蛋白質是否表達或者表達的相對豐度時有著極重要的作用。
時間錯誤的睡眠干擾人類基因表達的節律
一項研究發現，睡眠時機的破壞可能影響人類的許多基因的具有晝夜節律的轉錄。晝夜鐘調控著人體從白天到夜晚、從覺醒到睡眠的每日轉變。但是換班或飛行時差等因素破壞了這種睡眠時機和其他周期，可能導致影響深遠的生理和健康效應。為了評估改變這種睡眠-覺醒周期的時機如何可能影響基因轉錄的節律，Derk- J
GFP：熒光蛋白的起源
作者：?羅輯科學?? ? ? ?綠色熒光蛋白(簡稱GFP)，是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。GFP的熒光非常穩定，在激發光照射下，其抗光漂白能力比熒光素強很多。因此GFP及其變種被廣泛地用作分子標記；此外，GFP還被用作砷和一些重金屬的傳感器。? ?
綠色熒光蛋白GFP性質
GFP熒光極其穩定，在激發光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素（fluorescein）強，特別在450～490nm藍光波長下更穩定。 GFP需要在氧化狀態下產生熒光，強還原劑能使GFP轉變為非熒光形式，但一旦重新暴露在空氣或氧氣中，GFP熒光便立即得到恢復。而
GFP：熒光蛋白的起源
綠色熒光蛋白(簡稱GFP)，是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。GFP的熒光非常穩定，在激發光照射下，其抗光漂白能力比熒光素強很多。因此GFP及其變種被廣泛地用作分子標記；此外，GFP還被用作砷和一些重金屬的傳感器。 1962年，下村脩和約翰遜在一
GFP：熒光蛋白的起源
? ? ?綠色熒光蛋白(簡稱GFP)，是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色熒光。GFP的熒光非常穩定，在激發光照射下，其抗光漂白能力比熒光素強很多。因此GFP及其變種被廣泛地用作分子標記；此外，GFP還被用作砷和一些重金屬的傳感器。? ? ? ?1962年，下村
活體GFP綠色熒光成像系統
? 系統提供動物活體綠色熒光蛋白的實時觀察與成像等一系列的熒光檢測。能夠應用在像深度腫瘤，大動物等活體腫瘤追蹤觀察成像研究。??? 該設備是一個高靈敏度的圖像成像工作系統，主要利用特定波長的激光進行激發后，通過高靈敏度的致冷CCD進行實時檢測后，獲得所需的各類 特性的圖像，有利于進一步的分析作用?。
GFP與YFP有哪些區別
YFP和GFP其實是序列基本相同的兩種蛋白，YFP就是把Thr203以Tyr取代，GFP則不發出綠色熒光，而發出較長波長的黃色熒光，也就是YFP。因此兩者最大的區別則是發射波長了。我覺得這兩種蛋白標記應該都沒有問題，只是有幾個問題應該考慮：1. 應該標記在C端，一般的核定位序列均位于蛋白N端，如果將
gfp激發波長和發射波長
gfp激發波長是488nm，發射波長是507nm。gfp是綠色熒光蛋白的簡稱，是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色螢光。雖然許多其他海洋生物也有類似的綠色熒光蛋白，但傳統上，綠色熒光蛋白指首先從維多利亞多管發光水母中分離的蛋白質。綠色熒光蛋白主要應用1.由于熒光
GFP與YFP有哪些區別
YFP和GFP其實是序列基本相同的兩種蛋白，YFP就是把Thr203以Tyr取代，GFP則不發出綠色熒光，而發出較長波長的黃色熒光，也就是YFP。因此兩者最大的區別則是發射波長了。我覺得這兩種蛋白標記應該都沒有問題，只是有幾個問題應該考慮：1. 應該標記在C端，一般的核定位序列均位于蛋白N端，如果將
熒光素酶報告基因與綠色熒光蛋白（GFP）有什么區別
1。兩者的結果檢測方法不同。gfp綠色熒光蛋白，很直觀，能夠直接檢到熒光，在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到，對細胞的生命活動和其他并行的實驗安排影響很小。熒光素酶報告基因使用起來比gfp多一個步驟，因為熒光素酶是個酶，不發熒光，發熒光的是它的底物，熒光素。熒光素在細胞里（要說螢火蟲細胞我就不知道了
Measurement－of－GFP－Expression－and－DNA－Content－in－Permeabilized－Cells
ReagentsCells to be studied expressing green fluorescent protein (GFP). Note that the same cell type without GFP is needed as a control.1 X PBS2% Buff
Flow－Sorting－Fibroblasts－with－GFP－and－P.I.
ProtocolWash cells with PBS and trypsinize to a single cell suspension.Count an aliquot on a hemocytometer. Meanwhile centrifuge the cells (e.g. 1000
什么是gfp蛋白及其應用
綠色熒光蛋白GFP的研究進展及應用作者:吳沛橋～巴曉革～胡海～趙靜【摘要】 源于多管水母屬等海洋無脊椎動物的綠色熒光蛋白(GFP)～是一種極具應用潛力的標記物～有著極其廣泛的應用前景。我們就GFP的理化性質、熒光特性、改進和應用研究進行了綜述。【關鍵詞】 綠色熒光蛋白,GFP,,標記物,熒光特性,進
pcDNA3.1GFP轉染細胞實驗
實驗概要本實驗學習和掌握外源基因導入真核細胞的主要方法 — 脂質體介導的轉染。了解外源基因進入的一般性方法，觀測外源蛋白的表達（綠色熒光蛋白）。實驗原理外源基因進入細胞主要有三種方法：電擊法、磷酸鈣法和脂質體介導法，實際上其基本原理都是利用不同的方法在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質粒進入，但是由于
綠色熒光蛋白（GFP）的應用
骨架和細胞分裂 Kevin Sullivan's 實驗室 酵母菌內SPB 和微管動力學 酵母菌中肌動蛋白的動力 果蠅中MEI-S332蛋白 果蠅有絲分裂和mRNA運輸 網丙菌屬細胞骨架 RNA剪切因子的核內運輸 網丙菌屬的趨化作用 網丙菌屬中細胞骨架動力和細胞運動 核
三種常用基因功能驗正方法
科研人員在分析項目的過程中，碰到這樣的問題：通過各種手段（選擇清除分析、比較基因組學分析、轉錄組分析）獲得的行駛某種功能的某基因，如果進行實驗的驗正呢？一般分為：基因上調（基因轉染法）、基因下調（基因干擾法）后看蛋白表達水平、細胞功能改變、在體動物模型中相關功能的變化等。1、?RNA 干擾技術RNA
熒光素酶報告基因與綠色熒光蛋白（GFP）有什么區別
只能先就標題的問題談談我的認識。后面的追問我了解得也不全面。1。兩者的結果檢測方法不同。gfp綠色熒光蛋白，很直觀，能夠直接檢到熒光，在普通的細胞培養條件下都能夠觀察到，對細胞的生命活動和其他并行的實驗安排影響很小。熒光素酶報告基因使用起來比gfp多一個步驟，因為熒光素酶是個酶，不發熒光，發熒光的是
調控I型干擾素表達和抗病毒反應的新機制
病毒是嚴重危害人類健康的殺手之一，I型干擾素是調節抗病毒免疫的關鍵因子。Toll樣受體TLR3/4、RIG-I樣受體和胞內DNA受體cGAS在感知病毒感染后，通過激活TBK1和IRF3，誘導I型干擾素的表達，但I型干擾素表達失調也會引起紅斑狼瘡等自身免疫性疾病。因此，深入了解機體對I型干擾素表達