一文了解sgRNA（向導RNA）
向導RNA（guide RNA，gRNA），也稱為小向導RNA（small guide RNA，sgRNA）。是作用于動質體（kinetoplastid）體內一種稱為RNA編輯（RNA editing）的后轉錄修飾過程中。也是一種小型非編碼RNA。可與pre-mRNA配對，并在其中插入一些尿嘧啶（U），產生具有作用的mRNA。向導RNA編輯的RNA分子，長度大約是60～80個核苷酸，是由單獨的基因轉錄的，具有3'寡聚U的尾巴，中間有一段與被編輯mRNA精確互補的序列，5'端是一個錨定序列，它同非編輯的mRNA序列互補。 gRNA介導的RNA編 在編輯時,形成一個編輯體(editosome),以gRNAs內部的序列作為模板進行轉錄物的校正, 同時產生編輯的mRNA。gRNA3'端的oligo(U)尾可作為被添加的U的供體。 原核生物及植物線粒體中進行RNA編輯所需的RNA序列，是與正確編輯的RNA......閱讀全文
什么是sgRNA
shRNA是short hairpin RNA 的縮寫。翻譯為“短發夾RNA”。shRNA包括兩個短反向重復序列，中間由一莖環（loop）序列分隔的，組成發夾結構，幾個基因有一段核苷酸序列重疊在一起。重疊基因中不僅有編碼序列也有調控序列，大基因內包含小基因。重疊基因有多種重疊方式，更重要的可能是參與
sgRNA的設計與載體構建
實驗概要1. CRISPR的介紹：? ?? ? CRISPR的全稱為Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic ?Repeats(規律成簇的間隔短回文重復序列)。實際上就是一種基因編輯器，由于細菌自身具有降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免
基因編輯鼠－sgRNA表達載體構建
繼上次發表的Guide RNA設計和篩選的相關知識之后，希望大家還沒有忘記相關的操作和技巧，今天，我們就來和大家聊聊后續的實驗，在基因編輯鼠的過程中，sgRNA表達載體是如何構建的呢？在靶點篩選結束之后，下一步就要進行sgRNA載體構建。在構建表達載體前，應根據實驗目的選取合適的表達質粒。比如進行實
一文了解sgRNA（向導RNA）
向導RNA（guide RNA，gRNA），也稱為小向導RNA（small guide RNA，sgRNA）。是作用于動質體（kinetoplastid）體內一種稱為RNA編輯（RNA editing）的后轉錄修飾過程中。也是一種小型非編碼RNA。可與pre-mRNA配對，并在其中插入一些尿嘧啶
基于PCR評估sgRNA特異性的方法
CRISPR/Cas9已經成為一種通用的基因組工程工具，依賴于一個單導向RNA（sgRNA）和Cas9酶進行基因組編輯。研究人員可以用簡單、快速和經濟的方法來產生sgRNAs，因此能夠在培養細胞、小鼠、斑馬魚和其他模型系統中進行靶向誘變。為了靶向效率，預先篩選sgRNAs，對于成功誘變和減少動物
清華汪小我等人開發CRISPR－sgRNA設計工具
CRISPR/Cas9系統，是最近開發的一種強大而靈活的靶向基因組工程技術，包括基因組編輯和基因調控。這些應用需要設計高效、特異的單向導RNA（sgRNA）。然而，這仍然是具有挑戰性的，因為它需要考慮許多標準。已有研究開發出了一些sgRNA設計工具用于基因編輯，但是目前還沒有設計出用于基因調控
CRRSPR/Cas9基因敲除系統之sgRNA設計
sgRNA設計網站介紹sgRNA的在線設計網站有：1、http://crispr.mit.edu/?；2、http://www.e-crisp.org/E-CRISP/；等網站。這些網站雖然一定程度上滿足了部分研究 者的需要，但仍然存在很多不足和缺陷。例如：1、數據分析周期長；2、無具體的脫靶數據；
汪陽明組“miRNA與sgRNA聯姻”打造基因編輯體系控制新平臺
miRNA是一類長度約22個堿基的核糖核酸分子，廣泛表達于植物，動物以及病毒中。miRNA通過與Argonaute (AGO)等蛋白形成RNA誘導沉默復合物（RNA Induced Silencing Complex，RISC），在轉錄后水平抑制基因表達【1，2】。其表達譜呈現細胞特異性【3】，
同濟大學劉琦教授Cell子刊探討CRISPR的insilico－sgRNA設計
CRISPR/Cas9系統是目前進行基因編輯的有效技術。實現CRISPR/Cas9系統的核心問題之一是進行高效以及特異性的sgRNA設計。近日，同濟大學生命科學與技術學院劉琦教授課題組受邀在Cell子刊，Trends系列著名雜志《Trends in Biotechnology》（影響因子：12）
借助電轉方法將Cas9蛋白質/sgRNA導入小鼠原核受精卵生...
借助電轉方法將Cas9蛋白質/sgRNA導入小鼠原核受精卵生成非嵌合體突變體胚胎基因編輯解析：借助電轉方法將Cas9蛋白質/sgRNA導入小鼠原核受精卵生成非嵌合體突變體基因編輯技術指能夠讓人類對目標基因進行“編輯”，實現對特定DNA片段的敲除、加入等。而CRISPR/Cas9技術自問世以來，就有著
多個sgrna作用于同一個基因相互之間會不會有影響
但因為結構得到了簡化更方便研究者使用，進而對目的DNA雙鏈進行切割。 由于PAM序列結構簡單（5’-NGG-3’）。 通過基因工程手段對crRNA和tracrRNA進行改造CRISPR (clustered，作用是時間也比較長、魚類及哺乳動物細胞, regularly interspaced，且長期
強大的基因組編輯工具Crisp/cas9（二）
三、 產品推薦?針對sgRNA和cas9，我們有如下產品可供選擇哦：?1.sgRNA系列。?（1）sgRNA載體類型? 貨號 載體 啟動子 sgRNA 是否含有Cas9核酸酶基因 篩選標記/報告基因 SG001
CRISPR/Cas9設計工具，讓基因編輯不再高冷！
CRISPR/Cas9已經成為最常用的基因編輯系統。CRISPR/Cas9包括2部分：Cas9核酸內切酶和sgRNA(single guide RNA)，sgRNA由天然的tracrRNA (transactivating crRNA)和crRNA (CRISPR RNA)融合而來。 使用
中科院王艷麗課題組在Crispr/Cas系統獲得新的研究成果
2016年12月15日，Molecular Cell 雜志在線發表了中科院生物物理研究所王艷麗課題組關于CRISPR-Cas系統的最新研究成果，文章標題為“C2c1-sgRNA Complex Structure Reveals RNA-Guided DNA Cleavage Mechanism
設計cas9條件性基因敲除小鼠
其關鍵是構建帶有兩個Loxp位點的小鼠，即flox(flanked by loxP)小鼠。今天我們就來詳細介紹一下如何設計。共分三步：第一步，選擇外顯子。第二步，設計sgRNA。第三步，設計SSODN。聽起來蠻簡單的哈？下面我們詳細講講。第一步，選擇外顯子。1. 盡量選擇敲除所有轉錄本共用的外顯子。
如何正確選擇的CRISPR文庫？
確認基因型和表型之間的關系是功能基因組學的最終目標。如今，功能基因組學有了一種強大的新工具，那就是CRISPR-Cas9文庫。這種方法利用慢病毒載體大規模導入全基因組sgRNA文庫，能夠同時靶向數千個基因，實現高通量的功能基因篩選。 大家最常用的Cas9靶定5’-NGG PAM位點，這種位點在
浙江大學最新文章利用CRISPR/Cas9技術敲除基因
基因組編輯技術(Genome editing)是通過基因工程表達的序列特異的核酸酶對基因組進行切割，實現基因定點敲除、敲入等修飾，在基礎生物學領域的反向遺傳學研究、農業領域的種質改良和醫學領域的基因治療等方面有重要的應用價值。 來自浙江大學生科院的研究人員在 Golden-gate 克隆技術的
納米馬達讓CRISPRCas9鉆進癌細胞心窩進行基因編輯
在癌癥研究領域，“Cas-9–sgRNA”復合物是一種有效的基因編輯工具，但是其穿過細胞膜接觸腫瘤細胞基因組的能力非常低。來自美國和丹麥的科學家們現在開發了一種可以運動的納米馬達，可以有效輸送并釋放這種基因魔剪系統。在這篇發表于《Angewandte Chemie》的文章中，研究人員詳細描述了他
華南植物園獼猴桃多重高效基因組編輯系統研究取得進展
獼猴桃因其豐富的營養價值和獨特的風味而成為重要的全球性新興水果。隨著我國及世界獼猴桃產業的發展，如何快速高效地創制優異特色新種質并培育新品種，成為制約產業發展的關鍵。目前，基于成簇規律間隔短回文重復序列/成簇規律間隔短回文重復序列關聯蛋白（clustered regularly interspa
－Cell子刊突破：無需克隆的CRISPR新技術
來自荷蘭Hubrecht研究所和烏特勒支醫學中心（UMC Utrecht）、麻省理工學院的研究人員稱，他們開發出了一種自身克隆CRISPR/Cas9(scCRISPR)技術，可以繞開基因編輯過程中所有的克隆步驟，在數小時內完成CRISPR/Cas9介導基因突變及位點特異性轉基因敲入。他們的研究成
劉小樂、張鋒CRISPR最新論文
最近，來自哈佛大學醫學院Dana-Farber癌癥研究院、哈佛大學統計系和麻省理工學院-哈佛大學布羅德研究所的研究人員，在國際基因組研究權威期刊《Genome Research》發表題為“Sequence determinants of improved CRISPR sgRNA design”
清華大學Cell子刊發表CRISPR新文章
來自清華大學、哈佛醫學院和斯坦福大學等機構的研究人員，通過優化sgRNA的參數提高了CRISPR/Cas9系統在果蠅中的特異性和效率。研究結果發布在10月23日的《Cell Reports》雜志上。 清華大學醫學院的倪建泉（Jian-Quan Ni）博士和斯坦福大學的Jin Billy Li教
詳解CRISPR基因編輯技術的利與弊
說到基因編輯，大家都會想起CRISPR技術。這個當年名聲大噪的技術，現今依舊熱度不減，尤其是我們的CRISPR大神張鋒，近期發表的文章頻頻亮相于知名雜志，又引起一片熱議。時過境遷，CRISPR技術并沒有銷聲匿跡，一直在線。但任何事物包括技術有利就有弊，CRISPR技術當然也毫不例外。 CR
強大的基因組編輯工具Crisp/cas9（三）
人類 sgRNA 文庫相關產品? 貨號 文庫 sgRNA 數目 基因數目 管數 載體 L01-LS03 Innate kinases & ubiquitin ligases 475 239
生物物理所等揭示Cas9切割DNA及其被AcrIIC3抑制的分子機理
CRISPR/Cas系統是廣泛存在于細菌和古菌中抵抗病毒、質粒等外源核酸的獲得性免疫系統。II型的Cas9在RNA的介導下可以特異性識別、切割dsDNA，具有可編輯性，因此被廣泛用作基因編輯工具。由于其重要性，Cas9被系統地研究，大量的文獻報道了Cas9的原子分辨率結構、單分子測量結果、分子動
Detectseq技術為堿基編輯領域內提供了CBE脫靶位點
2021年6月8日，北大-清華生命科學聯合中心、北京大學生命科學學院伊成器教授課題組在Nature Methods雜志發表了題為“Detect-seq reveals out-of-protospacer editing and target-strand editing by cytosine
PNAS：首次利用CRISPR實現特殊干細胞成體基因修復
北京生命科學研究所的研究人員首次利用體外成熟的Cas9/sgRNA核糖蛋白復合物在病人特異性的隱性營養不良性大皰性表皮松解癥（Recessive dystrophic epidermolysis bullosa, RDEB）小鼠表皮干細胞實現了成體基因修復，從而為RDEB疾病以及其它遺傳性皮膚疾
基因編輯那么熱，可是你都會用了嗎？
基因編輯是一種遺傳工程技術，針對某個序列已知但功能未知的序列，通過改變生物的遺傳基因，使其特定的基因功能喪失作用，通過研究對生物體造成的影響，進而推測出該基因的生物學功能。本文為你科普基因編輯三大技術： 基因敲除 進行DNA水平編輯。一般用于構建基因敲除鼠模型。 CRISPR/Cas9：C
基因編輯鼠的構建－Guide－RNA設計和篩選
眾所周知，CRISPR/Cas9被業內譽為“基因剪刀”，它可以高效地實現靶基因的編輯，自問世以來就備受關注和青睞。CRISPR/Cas9系統是由CRISPR相關基因和Cas9組成，Cas9核酸酶會在向導RNA（Guide RNA, gRNA）的指引下，在完整基因組上的特定位點完成切割反應，同
Nature－Biotechnology：CRISPR再獲重要改良
Broad研究所的研究團隊日前開發了一個獨特的CRISPR-Cas9基因控制系統。該系統只需要催化活性的Cas9，就能在同一個細胞中敲除和激活不同基因。這一重要成果發表在十月五日的Nature Biotechnology雜志上，文章的通訊作者是Broad研究所Silvana Konermann，