摘要:綜述了RAPD技術的一些理論性問題,包括RAPD與其它分子標記技術相比的優點,影響結果重復性的因素,顯性標記產生的原因,條帶取舍的標準等。提出在實驗中解決這些問題的一些方法:嚴格控制反應條件,采用單倍體和單劑量標記,系統學研究中要結合其它方法進行分析,定位基因時要選用合適的群體等。 1 RAPD技術原理及特點 1.1原理RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA),即隨機擴增多態性DNA技術,是由美國科學家Wiliams和Welsh于1990年分別研究提出的,又稱任意引物PCR。它的應用是基于這樣的一個推理:對于同一模板DNA,用同一引物擴增既可能得到相同的帶譜(模板基因組間可能具有同源性),也可能得到不同的帶譜。僅在某一特定模板中出現的條帶就可作為該模板的分子標記。事實上,不同基因組DNA總是一定差異的,所以用RAPD就可以進行分子標記研究。理論上講,在一定的擴增條......閱讀全文
摘要:綜述了RAPD技術的一些理論性問題,包括RAPD與其它分子標記技術相比的優點,影響結果重復性的因素,顯性標記產生的原因,條帶取舍的標準等。提出在實驗中解決這些問題的一些方法:嚴格控制反應條件,采用單倍體和單劑量標記,系統學研究中要結合其它方法進行分析,定位基因時要選用合適的群體等。? 1 R
1 目的分子標記是一類建立在分子水平上的遺傳標記,它同樣具有遺傳標記的兩個特點,即可遺傳性和可識別性。廣義的分子標記包括同工酶和DNA分子標記兩類,狹義的分子標記則僅指后者。DNA分子標記通常是一些小分子量的DNA片段(幾十到2000bp左右),它們大量存在于真核生物的基因組內,能夠通過特定的技術和
實驗概要 RAPD(Random ?Amplified Polymorphic ?DNA,隨機擴增的多態性DNA)是建立于PCR實驗基礎上的檢測基因組DNA多態性的實驗技術。從1990年Williams首次應用該技術到今,短短幾年間,該技術由于具有快速、簡便、耗資相對較少,所需設備較少的特點,因
DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。運用隨機引物擴增尋找多態性DNA片段可作為分子標記。這種方法即為RAPD(Random amplified polymorphic DNA ,隨機擴增的多態性DNA)。盡管RAPD技術誕生的時間很短, 但由于其獨特的檢測DNA多態性的方式以
RAPD(Randomly Amplified Polymorphic?DNA),意為隨機擴增多態性DNA,是利用PCR技術進行隨機擴增,把擴增的DNA片段進行瓊脂糖凝膠電泳,根據DNA條帶的多態性來反應模板DNA序列上的多態性。RAPD同AFLP、SSR等分子標記一樣都基于PCR擴增,只是RAP
DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。運用隨機引物擴增尋找多態性DNA片段可作為分子標記。這種方法即為RAPD(Random amplified polymorphic DNA ,隨機擴增的多態性DNA)。盡管RAPD技術誕生的時間很短, 但由于其獨特的檢測DNA多態性的方式以及
RFLP和RAPD技術 概 述? DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段長度多態性)已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RFLP是根據不同品種(個
DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。運用隨機引物擴增尋找多態性DNA片段可作為分子標記。這種方法即為 RAPD(Random amplified polymorphic DNA ,隨機擴增的多態性DNA)。盡管RAPD技術誕生的時間很短, 但由于其獨特的檢測DNA多態性
(2)擴增結果差,條帶模糊或難以辨認。 ――更換Taq聚合酶緩沖液。 ――檢查引物(使用另外一個引物,或者將引物末端標記,在 16% 6mol/L尿素聚丙烯酰胺膠上電泳檢測)。 ――檢查Taq聚合酶活性(與不同批量的酶作比較)。 ――改變DNA濃度。 (3)高相對分子質量產物彌散狀分布>4kb。
1 導論 聚合酶鏈式反應(PCR)以其優越性極大地影響到了分子生物學的幾乎所有領域,并以其基本程序和DGGE(denaturing gradient gel electrophoresis),開發出多種檢測核苷酸變異的方法。 RAPD(Random Amplifed Polymorphic