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    QPCR實驗操作流程

    Q-PCR實驗流程一、 ①實驗前準備,每天早上到實驗室后,先把超凈工作臺的紫外燈打開15-20分鐘。②超凈臺前做實驗,需佩戴干凈的橡膠手套/一次性薄膜手套,RNA抽提需帶口罩。③取EP管/槍頭時需用鑷子,不可以用使用過的手套直接取用。取完EP管/槍頭后,袋子及時封好。④橡膠手套須放入超凈臺照射紫外,實驗操作過程中不得帶出超凈臺,移液器在一天工作結束后調至最大量程,并用75%乙醇清潔移液器,槍頭盒及超凈臺面。⑤實驗進行的過程中或觀看實驗時,沒有帶口罩不要在超凈臺前講話。二、 總RNA抽提1)細胞培養皿中細胞樣品用1*PBS洗兩次后,用1ml槍將PBS吸干凈,加入1ml Trizol (invitrogen)溶液,吹打混勻,并吸至1.5ml RNase free EP管中使細胞充分裂解,室溫靜置5min;如使用組織樣品,則先用液氮充分研磨組織樣品,然后加入1ml&......閱讀全文

    Dispendix I-DOT非接觸式微量分液系統在qPCR樣品準備的應用-1

    實時熒光定量PCR   Real-time qPCR實驗是生命科學研究領域的一項必備技能。相比于常規的PCR實驗,real-time qPCR靈敏度高,重復性好,已經被用于生命科學研究的各個領域,比如基因的差異表達分析,SNP檢測,等位基因的檢測,藥物開發,臨床診斷,轉基

    深藍云課堂:如何抓住qPCR數據分析的關鍵

      同學們又是做qPCR實驗的一天,有沒有懷著忐忑又期待的心情去點開“analysis”的呢?點開之后,發現擴增曲線不正常,或者Cq值過大,又或者SD值太高,那這樣的實驗結果還靠譜嗎?現在讓小編來告訴你,qPCR實驗的成功與否,關鍵在于各組數據是否達到判定標準以及是否符合實驗預期,小小的qPCR實驗

    如何抓住qPCR數據分析的關鍵

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    CRISPR觸發的內源Oct4或Sox2基因位點染色質重塑激活細胞

      題目:CRISPR-Based Chromatin Remodeling of the Endogenous Oct4 or Sox2 Locus Enables   Reprogramming to Pluripotency   期刊:Cell stem cell   影響因子:23.3

    CRISPR觸發的內源Oct4或Sox2基因位點染色質重塑激...(二)

    3. CRISPR-dCas9-SunTag-VP64系統單獨對Sox2基因進行內源激活,也能有效獲得iPS研究者單獨選取了能對Sox2進行激活的SgRNA進行iPS誘導,發現在有效激活內源Sox2基因表達的情況下,能成功得到誘導性多能干細胞,并能穩定增殖傳代。得到iPS通過體內體外實驗,如干細胞基

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    BioTNT PCR Array實驗操作介紹

      一.用戶需要自備的材料和儀器   Biotnt First Strand cDNA Synthesis Kit:A2010B0B03 ;   Biotnt qPCR Premix Kit: A2010A0112;   RNA 抽提:推薦使用Qiagen RNeasy Mini Kit (

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    GET到這些點,才能選對qPCR儀

    上次有讀者給小編留言,說自己的實驗室想買一臺qPCR儀,由于價格不菲,就怕買錯了對以后的實驗和經費都帶來麻煩。這里小編要說一句,好的產品越用越順心,差的產品越用越糟心。那么今天小編就和大家介紹一下一臺出色的qPCR儀需要具備哪些特點呢。無論是選擇國產還是進口的qPCR儀,首先要從儀器光學檢測的技術方

    BioTNT PCR Array實驗操作(一)

    一.用戶需要自備的材料和儀器 Biotnt First Strand cDNA Synthesis Kit:A2010B0B03 ;Biotnt qPCR Premix Kit: A2010A0112;RNA 抽提:推薦使用Qiagen RNeasy Mini Kit (50) 74104,RNas

    PCR Array 常見問題解答

    PCR Array FAQ:任何一臺能夠做QPCR的儀器據能夠做PCRarray嗎?QPCR 儀器都可以進行QPCR array的實驗。根據儀器采用的96孔或者384孔板,分為以下5種板型(plate format):plate formatInstrument providerQPCR instr

    SYBR Green法實時定量PCR優化攻略

    SYBR? Green是一種插入DNA分子的染料,具有多種分子生物學應用,其中之一就是用于實時定量PCR(qPCR)。隨著PCR循環的連續進行,這種染料的熒光強度會不斷增強,從而可以使人們對反應中的DNA進行定量。SYBR Green法及一些其他基于染料的qPCR方法比探針法的成本低,使用也更為方便

    分子克隆介紹

    各位小伙伴,大家還記得當初進實驗室的時候接觸到的一個實驗技能是什么呢?沒錯,是 PCR 擴增。小編曾經也是,看著自己親自配比 PCR 克隆擴增的每個組分,親眼看著瓊脂糖凝膠在紫外透光臺上發出的幽綠色的熒光,也是深深被迷住。但總不可能成天就對著這個邪魅的熒光發呆,對吧?看久了,她會愛上你的眼

    外泌體lncRNA介導的淋巴轉移機制的揭秘

      外泌體是指包含多種RNA(環狀RNA、miRNA、LncRNA和mRNA等)和蛋白質的盤狀囊泡(30-200nm)。幾乎所有類型的細胞均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于各種體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等。外泌體被視為特異性分泌的膜泡,能夠參與細胞間通訊。目前,有關外泌體分泌、攝取、

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    中科院昆明動物所成功揭示實驗大鼠起源馴化遺傳機制

      近日,中國科學院昆明動物研究所張亞平課題組與吳東東課題組合作,通過比較野生褐家鼠和實驗大鼠的基因組和轉錄組數據,解析了實驗大鼠的起源和馴化遺傳機制。相關研究成果發表在Molecular Biology and Evolution上。   實驗大鼠作為一種廣泛使用的模式動物,由野生褐家鼠馴化而來

    METTL3調控m6A甲基化修飾對小鼠脂肪細胞發育的重要作用

      今 天我們為大家解讀一篇今年4月3日發表在Nature communication(IF=11.878)的文章,作者研究了m6A修飾對小鼠脂肪組織發育的影響。   棕色脂肪組織(BAT)通過線粒體產生并耗散熱量,對機體起到保暖和控制肥胖的重要作用,而BAT的出生后發育,正是它們獲得這些功能的關

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    Azure在假病毒研究的應用

      新發和再發傳染病對公共衛生造成了嚴重影響。然而,由于這些病原體例如新冠COVID-19,SARS必須在3或4級別生物安全實驗室中進行處理,因此抗病毒藥或疫苗的研發常常受到阻礙。人們一直在積極尋求解決這一問題的替代方法,其中使用假病毒代替野生型病毒,是一種很好的手段。   假病毒是一種重組病

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    轉錄因子Sp9參與神經紋狀體蒼白球發育過程

      研究人員發現鋅指轉錄因子——Sp9,在LGE祖細胞中廣泛表達,對維持有絲分裂期后的紋狀體蒼白球MSNs至關重要,為我們理解神經元發育過程提供了新的證據。   研究背景   紋狀體是基地神經節的重要組成部分,是一類中型多棘神經元(MSNs)。MSNs的兩個重要的基地神經節亞型分別是紋狀體黑質

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    轉錄因子Sp9參與神經紋狀體蒼白球發育過程(二)

             對Sp9LacZ突變體中β-gal+和β-gal+/Foxp1+細胞數目統計,發現數量顯著減少。由于Sp9主要在紋狀體蒼白球細胞中表達。所以,Sp9的缺失影響了紋狀體蒼白球MSNs的產生。 &

    定量方法知多少-絕對定量

    在做qPCR實驗時,我們經常會問:“你是做絕對定量還是相對定量呢?”,而定量方法的選擇是取決于實驗的目標。絕對定量可測定目標核酸分子的實際拷貝數,但也是最費力、最復雜的定量形式。此方法要求周密的實驗方案和高度準確的標準曲線,常用于確定病毒滴度。使用標準曲線進行絕對定量絕對定量是通過樣品的Cq值和標準

    circRNA抑制由DNA感受器cGAS介導的長期造血干細胞耗竭

    中科院生物物理研究所的范祖森教授課題組主要從事腫瘤干細胞、免疫細胞發育分化及腫瘤靶標發現與腫瘤個體化治療等領域的研究,近期其團隊利用Arraystar Mouse CircRNA Array研究了小鼠骨髓細胞(BM)中分離的長期造血干細胞(LT-HSCs)和多能干細胞(MPPs)的circRNAs表

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