RTPCR實驗方法總結(2)
寡聚(dT)纖維素柱純化mRNA一、試劑準備1．3M醋酸鈉（pH 5.2）2．0.1M NaOH3．1×上樣緩沖液：20mM Tris-HCl(pH 7.6)；0.5M NaCl；1M EDTA（pH 8.0）；0.1%SLS(十二烷基氨酸鈉。配制時可先配制Tris-HCl(pH 7.6)、NaCl、EDTA（pH 8.0）的母液，經高壓消毒后按各成分確切含量，經混合后再高壓消毒，冷卻至65℃時，加入經65℃溫育（30min）的10%SLS至終濃度為0.1%。4．洗脫緩沖液：10mM Tris-HCl(pH 7.6)；1mM EDTA(pH 8.0)；0.05% SDS5．無水乙醇、70%乙醇6．DEPC二、操作步驟1．將0.5-1.0g寡聚（dT）-纖維懸浮于0.1M的NaOH溶液中。2．用DEPC處理的1ml注射器或適當的吸管，將寡聚（dT）-纖維素裝柱0.5-1ml，用3倍柱床體積的DEPC H2O洗柱。3．使用1×上樣緩......閱讀全文
RT-PCR實驗方法總結(2)
寡聚(dT)纖維素柱純化mRNA一、試劑準備1．3M醋酸鈉（pH 5.2）2．0.1M NaOH3．1×上樣緩沖液：20mM Tris-HCl(pH 7.6)；0.5M NaCl；1M EDTA（pH 8.0）；0.1%SLS(十二烷基氨酸鈉。配制時可先配制Tris-HCl(pH 7.6)、NaCl
RT-PCR實驗方法總結
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、退火
RT-PCR實驗方法總結大全
生物谷： RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。?要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2
RT-PCR實驗方法總結(1)
RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。?要求：?1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。?3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃度、
RT-PCR實驗方法總結大全
生物谷：?RT-PCR實驗有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需測RNA濃度，逆轉錄體系對RNA量還是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不會出太大問題。3. PCR，按常規。但如需擴長片段，則對前兩步要求較高，需要有完整的cDNA存在，不是單改變Mg2+濃
提高RT-PCR特異性的方法總結
第一鏈cDNA合成的起始可以使用三種不同的方法，各種方法的相對特異性影響了所合成cDNA的量和種類。????? 隨機引物法是三種方法中特異性最低的。引物在整個轉錄本的多個位點退火，產生短的，部分長度的cDNA。這種方法經常用于獲取5'末端序列及從帶有二級結構區域或帶有逆轉錄酶不能復制的終止位
Rt-PCR經驗總結
Rt-PCR實驗步驟一、實驗器具與材料：1、移液槍：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸頭：1ml、200μl、20μl3、勻漿管：5ml4、吸頭臺：放置1ml吸頭的一個，放置20μl吸頭的一個5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、試劑瓶：2個60ml的棕色試劑瓶（廣口，
Transwell侵襲實驗總結 （2）－實驗用品
我的課題涉及Transwell侵襲實驗和Transwell遷移實驗，其他方面的Transwell應用我不太清楚，因此這里主要談談Transwell侵襲實驗。1．實驗用品：① Transwell小室：多種廠家可提供，論壇里常用的是Costar、Corning、BD生產的小室，我們實驗室用的是Chemi
RT-PCR實驗方法
RT-PCR定義：是指對組織或細胞的總RNA進行抽提，把RNA反轉錄為cDNA，然后設計目的基因引物進行PCR，瓊脂糖電泳并數碼拍照，分析電泳條帶灰度值，判斷目的基因mRNA轉錄水平的相對量的變化。 RT-PCR流程簡介 一、抽提RNA： 1、防止RNA酶污染 180℃的高溫下
RT-PCR實驗方法大全(抽提RNA，RT，PCR)-2
關于平臺期和線性期的問題，實際上線性期是指數期，只不過碰巧2的冥和2的倍數是相同的。看上去任何一個時期都可以，實際上是不對的，因為牽涉到酶促動力學的問題，這個我也不懂，有一些專門的文章，好像，涉及到很多化學的東西。我們學醫的，也沒必要知道那些，但是其中主要是因為模板引物酶原料和buffer之間的關系