特異引物的PCR標記所用引物是針對已知序列的 DNA 區段而設計的,具有特定核苷酸序列(通常為 18—24 bp),可在常規PCR復性溫度下進行擴增,對基因組 DNA 的特定區域進行多態性分析。 ①序列標志位點 (Sequence Tagged Sites,STS) STS是對以特定對引物序進行PCR特異擴增的一類分子標記的統稱。通過設計特定的引物,使其與基因組DNA序列中特定結合位點結合,從而可用來擴增基因組中特定區域,分析其多態性。利用特異PCR技術的最大優點是它產生信息非常可靠,而不像RFLP和RAPD那樣存在某種模糊性。 ②簡單重復序列 (Simple Sequence Repeat,SSR) 簡單重復序(SSR)也稱微衛星DNA,其串聯重復的核心序列為1一6 bp,其中最常見是雙核苷酸重復,即(CA) n和(TG) n每個微衛星DNA的核心序列結構相同,重復單位數目10一60個,其高度多態性主要來源于串......閱讀全文
特異引物的PCR標記所用引物是針對已知序列的 DNA 區段而設計的,具有特定核苷酸序列(通常為 18—24 bp),可在常規PCR復性溫度下進行擴增,對基因組 DNA 的特定區域進行多態性分析。 ①序列標志位點 (Sequence Tagged Sites,STS) STS是對以特定對引物
所用引物的核苷酸序列是隨機的,其擴增的 DNA 區域事先未知。隨機引物PCR擴增的 DNA 區段產生多態性的分子基礎是模板 DNA 擴增區段上引物結合位點的堿基序列的突變,不同來源的基因組在該區段上表現為擴增產物有無差異或擴增片段大小的差異。隨機引物PCR標記表現為顯性或共顯性。 ①隨機擴增多
通用引物,含義為克隆位點兩旁的序列匹配,目的是引擴出DNA片段,主要用來測序。而序列特異性引物指一種測定基因突變的方法。通用引物是一般和載體多克隆位點兩旁的序列匹配,或者是與載體里面的一些啟動、終止元件匹配。這樣不管載體插入什么DNA片段,都可以用通用引物擴出來。通用引物可以用來測序,但是只是“通用
特異性的引物決定了所擴增的DNA片段,引物(primer)本質上是人工合成的小片段寡聚核苷酸片段,一般不超過50個堿基(通常18-25個),它們與所要擴增的DNA片段的正鏈與負鏈的末端完全互補。在“退火”時引物結合于DNA模板的起始和終止點,DNA聚合酶結合到這兩個位置,開始合成新的DNA鏈。
試劑、試劑盒正向和反向引物10 X T4 多聚核苷酸激酶緩沖液ATPT4 多聚核苷酸激酶模板DNA10 X PCR 擴增緩沖液4dNTP 混合液Taq DNA 聚合酶輕礦物油2 X 甲酰胺載樣液儀器、耗材96孔微量板熱循環儀用舊的X光膠片或者 Whatman 3MM 的過濾紙實驗步驟展
特異性免疫又稱獲得性免疫或適應性免疫,是一種經由與特定病原體接觸后,產生能識別并針對特定病原體啟動的免疫反應。 特異性免疫主要存在于有頜下門的脊椎動物中,也在細菌以及古菌中發現,即 CRISPR/Cas 系統。脊椎動物的后天免疫系統可粗略分為體液免疫和細胞免疫。這種免疫只針對一種病原。是獲得免
隨機引物標記(random primer labeling)是利用單鏈 DNA 與六核苷酸(hexamer)退火結合,以六核苷酸為引物,加入4種 dNTP,其中1種標有同位素或生物素,用 Klenow 片段催化合成帶有標記的互補 DNA 鏈,標記率高而且不受瓊脂糖影響。該法不適于標記 RNA。Fei
GSP在擴增低豐度的轉錄本時是最好的。OligodT引物建議用于高質量RNA及全長轉錄本的逆轉錄;隨機引物用于mRNA片段的逆轉錄。
與固有免疫相比,特異性免疫應答有三個主要特點: 1.特異性:特異性是指某一特定抗原刺激可以從免疫系統淋巴細胞庫中選擇出相應的T細胞或B細胞克隆,淋巴細胞與相應抗原的結合具有高度的特異性;多樣性是指T細胞庫或B細胞庫呈高度的異質性,是許許多多特異性識別抗原細胞克隆的總和,賦予機體具有識別周圍環境
B細胞是參與體液免疫的致敏B細胞。在抗原刺激下轉化為漿細胞,合成免疫球蛋白,能與靶抗原結合的免疫球蛋白即為抗體。免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)分為五類。 ①IgG是血清中含量最多的免疫球蛋白,唯一能通過胎盤的抗體,具有抗菌、抗病毒、抗毒素等特性,對毒性產物起中和、沉淀、補體結