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  • 發布時間:2019-03-29 18:36 原文鏈接: CTABPAGE實驗

    實驗方法原理該方案由方案 蛋白質的SDS-PAGE實驗 中介紹的標準 SDS-PAGE 衍變而來。雖然在進行變性凝膠電泳時多選用 SDS-PAGE, 但陰禽子去污劑 SDS 仍然存在一些局限。例如,SDS 在低溫下會結晶,某些情況下還會使蛋白質聚集或沉淀,而且有些蛋白在 SDS 凝膠中不能很好地溶解或者出現異常的遷移現象。這些情況下,可選擇采用陽離子去垢劑進行 PAGE。這里講到的不連續、陽離子去垢劑 PAGE 方法參照了 Atkins 等(1992)。這個系統中使用的是陽離子去垢劑 CTAB(十六烷基三甲基溴化銨),其濃縮膠以兩性離子精氨酸(作為濃縮溶液)和 tricine[N-三(羥甲基)甲基甘氨酸] 為緩沖體系。如果樣品沒有經過煮沸和外加還原劑,一些由 CTAB 電泳系統分離的蛋白質仍保持其酶學活性。
    實驗材料

    冷凍干燥后的蛋白樣品或塊狀蛋白樣品

    試劑、試劑盒

    丙烯酰胺貯存液CTAB 上樣緩沖液2-巰基乙醇分離膠混合物5 X tridne 電泳緩沖液

    儀器、耗材

    沸水浴裝置

    實驗步驟

    1.按照 蛋白質的SDS-PAGE實驗 制備凝膠,但濃縮膠和分離膠用本文配方。

    2.往上下緩沖液槽中注滿 IXtricine 電泳緩沖液。

    3.室溫下將蛋白樣品溶解在 50ul CTAB 上樣緩沖液中,終濃度為 5 mg/ml。如果不考慮樣品的生物學活性,可將其在有 2% 巰基乙醇存在下置沸水浴中加熱 3 min。

    4.將樣品加人上樣孔。

    5.100V 開始濃縮膠部分的電泳,注意電泳是從陽極到陰極。

    6.當樣品遷移至分離膠時,將電壓升至 150V。

    7.當染料前沿到達凝膠底部時,關掉電源,停止電泳。

    展開


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