四、案例
案例一：完整細胞的相互作用檢測
<背景>：單克隆抗體XMetA是胰島素受體（IR）變構部分的激動劑，其激活代謝Akt激酶信號通路，而對有絲分裂胞外信號調節激酶（ERK）信號通路幾乎沒有影響。為了研究這種選擇性信號通路的性質，作者驗證了XMetA對CHO細胞中IR，Akt和ERK的特異性磷酸化和活化的影響。
<目的>：完整細胞親和力檢測。
<方法>：研究者將表達短鏈型（IR-A）及長鏈型（IR-B）胰島素受體的不同濃度CHO細胞分別與XMetA孵育，通過離心獲得游離的XMetA，用KinExA儀器檢測親和力。另外，作者采取同樣的策略，用KinExA儀器檢測胰島素與CHO細胞表面IR-A，IR-B的親和力。
<結論>：XMetA與IR-A亞型的親和力為55±16pM，與IR-B亞型的親和力為50±11pM。另外，在對照抗體組，胰島素與IR-A亞型的親和力為156±14pM；在XMetA組，胰島素與IR-A亞型的親和力為216±100pM；在對照抗體組，胰島素與IR-B亞型的親和力為221±28pM；在XMetA組，胰島素與IR-B亞型的親和力為277±112pM。數據同時說明， XMetA與IR亞型的結合與胰島素無關。
案例二：細胞與上清未純化樣品檢測
<背景>：單克隆抗體（mAb）在體內與膜蛋白間親和力的可靠評估是腫瘤治療的主要問題。在BV展示系統中，膜蛋白能以天然狀態在病毒表面展示。
<目的>：細胞與上清中未純化樣品親和力檢測。
<方法>：研究者基于KinExA技術，結合桿狀病毒（BV）膜蛋白展示系統，描述了一個簡單而高度敏感的單克隆抗體評估方法。
<結論>：在BV表面展示的肝癌抗原Robo1吸附到磁珠上（BV beads）,其KD值(~10pM)與全細胞分析方法一致（R2=0.998），表明基于KinExA技術檢測方法提供了針對細胞表面蛋白的單克隆抗體親和力準確的評估。
上圖中顯示的是KinExA實驗中所使用的抗原。A圖中可溶性Robo1用于標準的實驗分析；B圖中表達天然活性Robo1的CHO細胞用4%多聚甲醛固定，用于細胞分析實驗；C圖中表達天然活性Robo1的BV磁珠用于BV展示分析
下圖采用KinExA技術檢測抗Robo1抗體與抗原的親和力。曲線上方的數字代表抗體的活性濃度。
參考文獻
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