武漢植物園植物資源可持續利用中心召開學術交流會
10月21日下午，武漢植物園植物資源可持續利用中心在2號會議室召開了2011年度學術交流會。交流會由中心主任彭俊華研究員主持，所屬學科組部分組長及研究生共50余人參加了會議。 交流會上，來自植物資源可持續利用中心各學科組的科研人員為大家作了題為“三萜抗癌化合物合成途徑關鍵酶基因的挖掘（天然藥物生物合成學學科組黎佳）”、Anthocyanin Biosynthesis in Peach Leaf (Prunus persica f. atropurpurea)（果樹分子育種學學科組周瑩）、“能源植物中國芒研究”（植物應用基因組學學科組趙華）、“兩株產油微藻分批培養過程中細胞密度、干重及總脂含量變化（植物生物技術學科組梅洪）”、“人工馴化對葡萄中糖代謝相關基因的影響（園藝作物生物學學科組辛海平）”和Biosynthesis and Regulation of Bioactive Compounds in Ep......閱讀全文
基因操作的工具酶3
（三）T4 DNA聚合酶 T4DNA聚合酶是從T4噬菌體感染了的大腸桿菌中分離出來的， 1.酶催活性： ⑴5′→3′的聚合酶活性 ⑵3 ′→ 5 ′的核酸外切酶活性。其外切酶活性要比大腸桿菌聚合酶 I 的活性高200倍。比Klenow 片段酶強100～1,00
基因操作的工具酶2
（三） DNA連接酶的反應條件影響連接效率的因素有：1. 溫度（通常在4-15℃ ）2. ATP的濃度(10μM／L - 1mM／L )3. 連接酶濃度（一般平末端大約需1～2U，黏性末端僅需0.1U）4. 反應時間（通常連接過夜）5. 插入片段和載體片段的摩爾比（ 1∶1～5∶1）（四）T4 DN
基因操作的工具酶1
一、 限制性核酸內切酶及其應用（一）限制性核酸內切酶的發現當λ(k)噬菌體侵染E.coliB時，由于其DNA中有EcoB核酸酶特異識別的堿基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中雖然也存在這種特異序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷甲硫氨酸（SAM）將甲基轉移給限制酶識別序列的特定
單胺氧化酶A基因的概述
MAO-A偏重于極性芳香胺5-羥色胺、去甲腎上腺素和腎上腺素的分解脫氨，它對選擇性抑制劑如氯吉蘭敏感。
什么是單胺氧化酶A基因
人類單胺氧化酶（MAO）單體的絲帶模型。圖中的MAO-A與線粒體的外膜相連，并與FAD和抑制劑氯吉蘭相結合 單胺氧化酶A（MAO-A）存在于神經元和星形膠質細胞中。除中樞神經系統外，MAO-A還存在于肝、胃腸道和胎盤中。MAO-A是消化道攝取的單胺類物質代謝中的重要酶，可以使單胺類神經遞質失活
幾丁質酶用于抗病基因工程
?進入20世紀80年代，隨著分子生物學的蓬勃發展，使幾丁質酶用于生物防治的研究上升到基因工程水平。1984年Shapira把幾丁質酶基因從粘質沙雷氏菌（S.marcescens）克隆到E.coli后，被整合的E.coli和酶的提取液，在室溫條件下均表現出對真菌的生物防治能力。1988年Phillio
基因突變致酶活性異常
? 由于基因突變導致酶活性降低或增高所引起的疾病稱為遺傳性酶病（hereditary enzymopathy)。遺傳性酶病與分子病的區別在于后者引起機體功能障礙是蛋白質分子變異的直接后果；而前者則由于合成酶蛋白結構異常或調控系統突變后導致酶蛋白合成數量減少，通過酶的催化作用間接導致代謝紊亂所
微生物果膠酶基因
近10年來，已從不同屬的真菌、細菌和放線菌中克隆和測序的果膠酶基因至少有70個(表1)，其中來自真菌的超過40個，且大多是多聚半乳糖醛酸酶基因。從中克隆到果膠酶基因的真菌主要有曲霉菌、炭疽菌、鐮刀菌和灰霉菌等。例如目前已從黑曲霉(Aspergillus niger)中克隆到6個多聚半乳糖醛酸酶基因，
單胺氧化酶A基因的功能
單胺氧化酶A的一個重要作用是平衡大腦中5-羥色胺的分泌。5-羥色胺的濃度水平會影響到人用來控制憤怒情緒的腦部活動區域。因此，MAOA基因表達量的高低，直接影響個體的情緒水平，進而對其行為產生影響。 MAOA基因能夠調節大腦中一種分解多巴胺和其他神經傳導物質的酶的活性，類似于抗抑郁藥含有的“感覺
植物酯酶同工酶基因的染色體定位
一、原理酶和蛋白質是基因表達的產物，基因位于染色體上。當某一對同源染色體缺失時，位于這對染色體上的基因和它們所編碼的酶或蛋白質也就隨之丟失。以正常小麥及其缺體系為材料，通過蛋白質聚丙烯酰胺凝膠電泳和同工酶分析，即可確定編碼這些酶或蛋白質的基因在基因組中的定位（位于哪對染色體上）。酯酶是催化酯類化合物
限制酶在基因工程和基因診斷中的應用
限制酶的上述特性在基因工程和基因診斷中具有重要用途：①首先不論DNA的來源如何，用同一種內切酶切割后產生的粘性末端很容易重新連接，因此很容易將人和細菌或人和質粒任何兩個DNA片段連接在一起，即重新組合，這是重組DNA技術的基礎。②人類的基因組很大，不切割無法分析其中的基因。限制酶能把基因組在特異的部
基因重組胰蛋白酶與傳統胰酶的消化對比
胰蛋白酶（Trypsin）是一種絲氨酸蛋白水解酶。其前體為無生物活性的胰蛋白酶原（trypsinogen），產生于胰臟。隨胰液分泌到小腸中，被小腸中的腸肽酶激活后，能將蛋白質分解為多肽，進而分解成為氨基酸。其切割肽鏈的位點主要位于賴氨酸或精氨酸的羧基端。故在體外細胞培養中，胰蛋白酶被用于消化貼壁細胞
等位基因酶的基本信息
中文名稱等位基因酶英文名稱allozyme定 義由等位基因產生的一組酶，其氨基酸序列不同，因此在性質上有差異。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
熒光素酶基因是怎樣產生的
用作報告基因的熒光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要來自細菌和螢火蟲。細菌熒光素酶以脂肪醛為底物，在還原型黃素單核苷酸參與下，使脂肪醛氧化為脂肪酸，同時釋放出光子。螢火蟲的熒光酶在鎂離子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羥基喹啉類物質生成氧化熒光素，同時放出光
熒光素酶基因是怎樣產生的
用作報告基因的熒光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要來自細菌和螢火蟲。細菌熒光素酶以脂肪醛為底物，在還原型黃素單核苷酸參與下，使脂肪醛氧化為脂肪酸，同時釋放出光子。螢火蟲的熒光酶在鎂離子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羥基喹啉類物質生成氧化熒光素，同時放出光
雙螢光素酶報告基因檢測
螢光素酶報告基因系統廣泛應用于真核生物基因表達和細胞生理學研究，包括受體活性、轉錄因子、細胞信號轉導、mRNA加工和蛋白質折疊等。螢光素酶是理想的報告基因，因為哺乳動物細胞中不含內源性螢光素酶，一旦轉錄完成立刻就生成功能性的螢光素酶。單螢光素酶報告基因實驗往往會受到各種實驗條件的影響，而雙螢光素
等位基因酶的基本信息
中文名稱等位基因酶英文名稱allozyme定 義由等位基因產生的一組酶，其氨基酸序列不同，因此在性質上有差異。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），酶（二級學科）
熒光素酶基因是怎樣產生的
用作報告基因的熒光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要來自細菌和螢火蟲。細菌熒光素酶以脂肪醛為底物，在還原型黃素單核苷酸參與下，使脂肪醛氧化為脂肪酸，同時釋放出光子。螢火蟲的熒光酶在鎂離子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羥基喹啉類物質生成氧化熒光素，同時放出光
熒光素酶基因是怎樣產生的
用作報告基因的熒光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要來自細菌和螢火蟲。細菌熒光素酶以脂肪醛為底物，在還原型黃素單核苷酸參與下，使脂肪醛氧化為脂肪酸，同時釋放出光子。螢火蟲的熒光酶在鎂離子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羥基喹啉類物質生成氧化熒光素，同時放出光
雙熒光素酶報告基因測試
在用螢火蟲熒光素酶定量基因表達時 ，通常采用第二個報告基因來減少實驗的變化因素。但傳統的共報告基因（比如CAT，β-Gal，GUS）不夠便利。因為各自的測試化學，處理要求，檢測特點存在差異。Promega提供一種先進的雙報告基因技術，結合了螢火蟲熒光素酶測試和海洋腔腸熒光素酶測試。雙熒光素酶報告基因
基因工程常用的工具酶2
①增加限制酶的用量，平均每微克底物DNA可高達10單位甚至更多。②增加酶反應體系的體積，以使潛在的抑制物被相應的稀釋。③延長酶解反應的保溫時間。④向反應體系中添加亞精胺（spermidine）（終濃度為1~2.5mmol/L），亞精胺與負電性的雜質結合。注意，亞精胺在4℃時會沉淀DNA，因此最好在反
熒光素酶基因是怎樣產生的
用作報告基因的熒光素酶基因emphasis：role=italiclucemphasis主要來自細菌和螢火蟲。細菌熒光素酶以脂肪醛為底物，在還原型黃素單核苷酸參與下，使脂肪醛氧化為脂肪酸，同時釋放出光子。螢火蟲的熒光酶在鎂離子、三磷酸腺苷和氧的作用下，催化6-羥基喹啉類物質生成氧化熒光素，同時放出光
基因工程常用的工具酶1
一、限制性核酸內切酶（restriction endonuclease）1．定義：凡能識別和切割雙鏈DNA分子內特定核苷酸序列的酶，也稱為限制酶（restriction enzyme，RE）。2．類型：來自原核生物，有三種類型。Ⅰ型：兼具甲基化修飾和ATP參與的核酸內切酶活性，隨機切割。Ⅱ型：大多能
β半乳糖苷酶基因在基因工程中的應用
β-半乳糖苷酶基因被廣泛地應用于包括作為報告基因、構建載體、轉基因研究和基因治療等多個分子生物學研究領域。具體介紹如下：1在載體構建中的應用β-半乳糖苷酶可催化X-ga1（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） 水解，產物呈藍色，易于檢測和觀察，基于這一特點，β-半乳糖苷酶基因常作為載體組分，
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的應用原理
應用原理轉錄因子是一種具有特殊結構、行使調控基因表達功能的蛋白質分子，也稱為反式作用因子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合，這些特異性的序列被稱為順式作用元件，轉錄因子的DNA結合域和順式作用元件實現共價結合，從而對基因的表達起抑制或增強的作用。熒光素酶報告基因實驗（luciferase
熒光素酶報告基因的技術流程
（1） 用生物信息學方法分析并預測啟動子區可能的轉錄因子結合位點。（2）設計引物用PCR法從基因組DNA中克隆所需的靶啟動子片段，將此片段插入到熒光素酶報告基因質粒（pGL3-basic）中。（3）篩選陽性克隆，測序。擴增克隆并提純質粒備用。（4） 擴增轉錄因子質粒，提純備用。同時準備相應的空載質粒