蛋白質轉印法檢定蛋白質
蛋白質轉印法檢定蛋白質 蛋白質經SDS-PAGE后,膠片浸入轉印緩沖液,蛋白質可被轉印到硝化纖維紙(nitrocellulose) 上,先經?素洗去SDS,并使蛋白質回?原態抗原性,可使用抗體進?免疫染色 (Towbin et al, 1979)。儀器用具:電泳轉印槽 (Hoefer Transphor TE 52):轉印槽 (可容納4 個轉印三明治)轉印三明治 (轉印夾、方形海綿墊2 片)轉印紙:早期使用硝化纖維紙,現在多用尼龍材質者Immobilon P (Millipore IPUH 000 10, 0.45 μm, PVDF 材質)濾紙 ......閱讀全文
Southern 轉印分析
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜,經烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以進行探針的雜合(hybridization) 反應。儀器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海綿;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)
浸入式電轉印
實驗概要采用浸入法將蛋白質從凝膠轉移至硝酸纖維素膜是先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維素膜,然后再將這種夾層組合浸入盛有大量緩沖液的轉印槽內,使電流從轉印槽的一側通向另一側。通過電洗脫的方法可將蛋白質從凝膠中轉印至濾膜上,如同在凝膠中遷移,只不過移動方向與膠平面垂直。若操作仔細,這是一種可將許多蛋白質轉印至
半干轉印與濕式轉印的區別 | WEALTEC 威泰克
剛接觸 Western Blot 不久的用戶,在選購 WB 設備時,經常會遇到儀器選型的問題:為什么常見的蛋白質電泳的轉膜有兩種方式可以選擇,干式和濕式,那么哪種方法更適合我們呢?這里我們結合美國 WEALTEC 公司的 E-Blotter 濕轉槽和 YRDIMES 快速半干轉印槽舉例說明。
Western blot轉印的優化
從SDS凝膠中進行Western蛋白轉印的優化需要對一系列參數進行考慮。目的是轉印所有凝膠上的蛋白并將其定量地轉移到轉印膜上。進行高效轉印需要一定程度的優化,尤其是對于大分子量和小分子量蛋白。轉印后,凝膠上應不殘留或殘留很少的蛋白。可以在轉印后進行染色進行檢測。轉移出凝膠的蛋白應該僅在接觸凝膠的膜的
Southern 轉印分析方法步驟
在膠體中的DNA 可利用毛細現象的作用將DNA 牽引轉印至覆蓋在膠片上的濾膜,經烘烤或UV 照射后,可使DNA 固定在膜上,以進行探針的雜合(hybridization) 反應。儀器用具:玻璃缸;玻璃板或吸水海綿;Crosslinker (Stratalinker 1800, Stratagene)
半干電轉印法
實驗概要本方法是先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維濾膜,然后再將這種夾層組合直接置于兩個乎板電極之間,采用這種半干方法可將蛋白質從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上。平板可以是石墨(這種平板較便宜,但使用100次后必須更換)制成的,也可以是鉑金的(這種子板價格較貴,但使用壽命較長)。通過電洗脫將蛋白質從凝膠中轉印至
蛋白質轉印法
蛋白質經SDS-PAGE后,膠片浸入轉印緩沖液,蛋白質可被轉印到硝化纖維紙(nitrocellulose) 上,先經尿素洗去SDS,并使蛋白質回復原態抗原性,可使用抗體進行免疫染色 (Towbin et al, 1979)。儀器用具:電泳轉印槽 (Hoefer Transphor TE 52):轉印
半干電轉印法
先將凝膠緊貼于一塊硝酸纖維濾膜,然后再將這種夾層組合直接置于兩個乎板電極之間,采用這種半干方法可將蛋白質從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上(Kyhse-Andersen1984)。平板可以是石墨(這種平板較便宜,但使用100次后必須更換)制成的,也可以是鉑金的(這種子板價格較貴,但使用壽命較長)。通過電洗
轉印槽使用方法步驟
伯樂bio-rad轉印槽可快速、高質量地轉印小型凝膠。作為Mini-PROTEAN 3 電泳系統的一個組件,伯樂bio-rad轉印槽能容納2 個凝膠支架轉印夾,用于在Mini-PROTEAN 3 電泳槽內電轉印兩種小凝膠(Mini-PROTEAN 3 凝膠和ReadyGel 預制膠)。伯樂b
Southern 印跡實驗——電轉印法
實驗方法原理因為聚丙烯酰胺凝膠的扎徑太小,DNA不能在其橫截面上有效地擴散,毛細管轉移法不適用DNA從聚丙烯酰胺凝膠的轉移。因此,聚丙烯酰胺凝晈必須在低離子強度的緩沖液中用電轉移法進行印跡。實驗材料DNA試劑、試劑盒TBE儀器、耗材Scotch-Brite墊Whatman濾紙實驗步驟1. ?在非變性