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除了 PCR 和 Southern 雜交可以檢測病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 點跡雜交方法檢測在分離的噬斑中的重組病毒。本實驗主要介紹用這3種方法來檢測痘苗DNA。實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU 培養基篩選試劑4 dNTP 混合物MgCl2儀器、耗材24 孔組織培養板杯狀超聲儀實驗步驟實驗試劑準備詳見「其他」。1. 吸出匯片生長單層細胞的培養基。1.1 對于 XGPRT 篩選，用 BS-C-1 細胞。1.2 對于 TK 篩選，用 HuTK-143B 細胞。2. 用 37℃ 的 PBS 或胰酶/EDTA 洗細胞 1 次，以除去剩余血清。3. 用剛好覆蓋單層細胞、37℃ 的胰酶/EDTA（對于 ......閱讀全文
實驗方法原理本方案用DNA點跡雜交檢測噬斑以鑒定重組病毒。像點跡雜交一樣，將感染細胞裂解物印跡在硝酸纖維素膜上（可參考「痘苗DNA檢測實驗」中「斑點雜交法」）。用可以識別外源基因表達蛋白的抗體與膜一起孵育，用125I 標記的蛋白 A 檢測結合的抗體，還可應用化學發光檢測系統，如 Amersham E
四、微生物學診斷 （一)病毒分離 采取病人唾液，脊髓液及口腔、宮頸、陰道分泌液，或角膜結膜刮取物等接種易感細胞中培養1～2天，出現細胞腫用脹，變圓，相互融合等病變，可作初步診斷。然后用免疫熒光法（IFA)，酶聯免疫吸附試驗（ELISA)進行鑒定，確診HSV。必要時進行分型。 （二