克隆化基因的體外轉錄和翻譯實驗
DNA的克隆是指在體外將含有目的基因或其它有意義的DNA片段同能夠自我復制的載體DNA連接，然后將其轉入宿主細胞或受體生物進行表達或進一步研究的分子操作的過程，因此DNA克隆又稱分子克隆，基因操作或重組DNA技術。實驗材料DNA試劑、試劑盒TE核苷三磷酸混合液RNA聚合酶緩沖液異丁醇NaOHTCA儀器、耗材離心機搖床實驗步驟1. 亞克隆編碼蛋白質的目的DNA片段于質粒載體的SP6或T7啟動子的下游。 2. 通過CsCl/溴化乙錠離心或PEG沉淀制備質粒DNA。 3. 用位點在終止密碼子的立即下游處（理想是50~200堿基）而不存在于蛋白質編碼區中的限制性內切酶切割DNA。取小份樣品在瓊脂糖凝膠電泳中檢測。4. 酚抽提及乙醇沉淀純化DNA，重溶于50 μl TE緩沖液。 5. 在室溫建立如下的25 μl 的反應混合液（避免精胺使DNA模板沉淀......閱讀全文
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2 的培養瓶內。實驗材料胰蛋白酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理 將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2 的培養瓶內。實驗材料 胰蛋白酶試劑、試劑盒 硅油儀器、耗材 克隆培養環巴氏吸管生長培養基多孔板無菌鑷移液器粗頭筆實驗步驟 1. 觀察細胞克隆，用氈制粗頭筆
用克隆環分離細胞克隆
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2 的培養瓶內。 實驗材料
單克隆與克隆的區別
無性增殖（分裂、生殖）叫做克隆，克隆是一個很大的范圍，單克隆是指的單克隆抗體，它由融合的細胞得來。是由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。“單”和“克隆”要分開看，克隆是因為它是無性增殖來的，通常是一種人工誘導的無性生殖方式或者自然的無性生殖方式（如植物）。是原來細胞的基因的
用克隆環分離細胞克隆
實驗方法原理將集落在瓷制克隆環、玻璃環、PTFE 環或者不銹鋼環中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一個孔或者直接種于 25 cm2?的培養瓶內。實驗材料胰蛋白酶試劑、試劑盒硅油儀器、耗材克隆培養環巴氏吸管生長培養基多孔板無菌鑷移液器粗頭筆實驗步驟1. 觀察細胞克隆，用氈制粗頭筆或 Nik
簡述分子克隆化克隆的選擇
①直接篩選：有些載體帶有可辨認的遺傳標記，能有效地將重組分子與本底區分。例如：有些λ噬菌體攜帶外源基因后形成的噬菌斑就會從原來的混濁變為清亮；還有些載體分子攜帶外源基因后，形成的菌落或噬菌斑的顏色有明顯變化，如藍色變為無色；有些λ噬菌體能侵染甲菌而不能侵染乙菌，攜帶外源DNA片段后便能侵染乙菌，
單克隆抗體的克隆方法
經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過
基因克隆
外源DNA和質粒載體的連接反應?外源ＤＮＡ片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈ＤＮＡ５'磷酸和相鄰的3'羥基之間?形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成４個新的磷酸二酯鏈。但如果質粒ＤＮＡ已去磷酸化，則吸能形成２個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的兩個雜交
DNA克隆
DNA克隆（主要內容如下）·?????????General Procedure·?????????PCR Cloning·?????????Subcloning·?????????ET Cloning·?????????Vector Preparation·?????????Ligation Re
單克隆抗體的克隆化方法
克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失。 克隆化的陽性雜交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細