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PCR可用以指數擴增位于兩個特定引物雜交位點之間的DNA片段，而在連接介導 的單側PCR中，本質上，它只需要一個引物雜交位點的特異性，第二個引物是通過連 接反應加上的單一接頭。這個接頭和旁側的基因特異性引物一起可以對任 何DNA片段進行指數級的擴增。由于一個確定的已知長度的序.列被加于每個片段，可以完整地擴增一些復雜的DNA群體，如分辨率達到單堿基水平的序列梯。來連接介導的單側PCR實驗方法原理實驗材料0.4μg μL溶于pH 7.5的TE緩沖液的經打斷的基因組DNA試劑、試劑盒 第一鏈合成混合物 含有寡核苷酸引物I20μmol L單側接頭混合物連接酶稀釋液連接酶混合物2000 ?3000 Weiss 單位 mL T4 噬菌體 DNA 連接酶用于沉淀的鹽混合物100%乙醇 冰冷和室溫75%乙醇 室溫擴增混合物 含有接頭引物和引物22 U μL Vent DNA聚合酶混合物儀器、耗材1.5 mL硅化微量離心管帶管扣(可選)4°C和......閱讀全文
連接介導的單側PCR 從單層細胞制備用于DMS足跡分析的基因組DNA 從懸浮細胞中制備用于DMS足跡分析的基因組DNA
現代分子生物學和免疫學的進展加深了我們對許多疾病的了解，并且導致了免疫新策略的產生，免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。本文盤點了與免疫學有關的分子生物學實驗技術匯總。 一、GST pull-down實驗 GST是指谷胱甘肽巰基轉移酶，GST pull-down實驗是一個行之有效的驗