PCR引物設計及評價實驗
實驗方法原理聚合梅鏈式反應(polymerase chain reaction)即PCR技術,是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法,故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多,最廣泛的手段之一,而引物設計是PCR技術中至關重要的一環,使用不合適的PCR引物容易導致實驗失敗:表現為擴增出目的帶之外的多條帶(如形成引物二聚體帶),不出帶或出帶很弱,等等。現在PCR引物設計大都通過計算機軟件進行,可以直接提交模板序列到特定網頁,得到設計好的引物,也可以在本地計算機上運行引物設計專業軟件。實驗材料目的基因序列儀器、耗材電腦實驗步驟一、引物搜索1. 打開Primer premier5.0軟件,調入人瘦素(leptin)基因序列:點擊“file” “open” “ DNA sequence”;或者直接點擊 “file” “n......閱讀全文
PCR引物設計及評價實驗
實驗方法原理聚合梅鏈式反應(polymerase chain reaction)即PCR技術,是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法,故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多,最廣泛的手段之一,而引物設計是PCR技術中至關重要的一環,使用不合適的PCR引物容易導致實
PCR引物設計及評價實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 聚合梅鏈式反應(polymerase chain reaction)即PCR技術,是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法,故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多,最廣泛的手段之一,而引
PCR引物設計及評價實驗(二)
5. ?按照搜尋結果顯示,在主窗口中檢查該引物對的二級結構情況,逐條分析,依次篩選。下面進行序列篩選:點擊其中一對引物,如第21#引物,在“Peimer Premier”主窗口,如圖所示:該圖分三部分,最上面是圖示PCR模板及產物位置,中間是所選的上下游引物的一些性質,最下面是四種重
PCR引物設計及評價實驗(一)
實驗方法原理聚合梅鏈式反應(polymerase chain reaction)即PCR技術,是一種在體外快速擴增特定基因或DNA 序列的方法,故又稱基因的體外擴增法。PCR技術已成為分子生物學研究中使用最多,最廣泛的手段之一,而引物設計是PCR技術中至關重要的一環,使用不合適的PCR引物容
PCR引物設計及評價
【實驗目的】1、掌握引物設計的基本要求,并熟悉使用Primer premier5.0軟件進行引物搜索。2、掌握使用軟件oligo6.0對設計的引物進行評價分析。【實驗原理】一、引物設計原則聚合梅鏈式反應(polymerase chain reaction)即PCR技術,是一種在體外快速擴增特定基因或
PCR引物設計及評價
【實驗目的】1、掌握引物設計的基本要求,并熟悉使用Primer premier5.0軟件進行引物搜索。2、掌握使用軟件oligo6.0對設計的引物進行評價分析。【實驗原理】一、引物設計原則聚合梅鏈式反應(polymerase chain reaction)即PCR技術,是一種在體外快速擴增特定基因或
PCR實驗技術指南(引物設計)
所謂“工欲善其事,必先利其器”,這年頭手工設計引物的人似乎不多,還是用軟件方便些,防止你一不小心看走眼,丟一個堿基,同時計算起來也方便。設計軟件有很多,既可以在線設計(如Primer3 http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi),
PCR實驗技術指南之引物設計
PCR實驗技術指南之引物設計??????? 所謂“工欲善其事,必先利其器”,這年頭手工設計引物的人似乎不多,還是用軟件方便些,防止你一不小心看走眼,丟一個堿基,同時計算起來也方便。設計軟件有很多,既可以在線設計,也可以用Primer、Oligo等等。細心地進行引物設計是PCR 中zui重要的一步。理
PCR引物設計及軟件使用技巧
PCR引物設計及軟件使用技巧張新宇,朱有康,高燕寧(中國協和醫科大學中國醫學科學院腫瘤研究所,北京100021)摘要:本文旨在介紹使用軟件設計PCR引物的技巧。在PCR引物設計原則的基礎上,詳細介紹了兩種常用引物設計軟件的基本使用方法,并對其各自的優缺點進行了比較。一般性引物自動搜索可采用“Prem
PCR引物設計原則
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。因此,引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構,就要避開它。如這一段不能形成二級結構,那就可以在