哺乳動物細胞瞬時基因轉移法制備重組蛋白實驗
報道顯 TK，在 過 去 的 1 0 年 ，已經開發出 了多種高效的瞬時轉染（transient transfection) 方法 ， 它們可 以 滿 足 甚 至 超出 了 上 述 需 求 。 目 前 蛋 白 質 的 瞬 轉 表 達 主 要 是 在H E K 2 9 3 衍生的細胞系中進行, 而同時研究人員也在努力發展針對 C H O 細胞的效率相當的方法。這有利于維持相同的宿主細胞背景，從而在治療用蛋白質的整個研發過程中可以使產品的性質保持一致。有 關 當 前 T G E 的詳細總結可參考一些最近發實驗步驟一、轉染方法對于脂質體轉染 (Upofection), 可以從商業途徑獲得許多配方，這些配方都具有單一的ZL化組分，而且毫無疑問，它們中的大部分都能非常有效地將質粒 D N A 轉 人 細 胞 。其缺點是價格不菲—- 在使用這些試劑時，對于超出數百毫升規模的瞬時轉染，經濟上是不可行的。大規模的瞬時轉染方法要求轉染試劑能很容易......閱讀全文
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇的液體緩沖液。
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇
用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤
哺乳動物細胞實驗室的構建方案
一、實驗室設計細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，為10萬級潔凈
哺乳動物細胞實驗室的構建方案
一、實驗室設計 細胞培養是一種無菌操作技術，要求工作環境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養室和設計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細胞培養室的設計原則一般是無菌操作區設在室內較少走動的內側，常規操作和封閉培養于一室，為10萬
哺乳類動物的基因轉移方法
哺乳類動物基因轉移方法，是將改建后的目的基因（或基因組片段）用顯微注射等方法注入實驗動物的受精卵（或著床前的胚胎細胞），然后將此受精卵（或著床前的胚胎細胞）再植入受體動物的輸卵管（或子宮）中，使其發育成攜帶有外源基因的轉基因動物。?根據外源基因導入的方法和對象的不同，制作轉基因動物的方法主要有顯微注
重組蛋白表達系統
選擇合適的蛋白表達系統是重組蛋白成功表達的關鍵。需要考慮以下方面的因素，包括：目標蛋白性質、用途、蛋白質產量和成本。此外，許多蛋白質表達項目也存在著風險，尤其是大蛋白、膜蛋白、核蛋白和具有大量翻譯后修飾的蛋白質。目前卡梅德生物可以提供幾種表達系統可供客戶選擇，不同的系統有不同的特性和應用。在這里，我
重組蛋白表達系統
選擇合適的蛋白表達系統是重組蛋白成功表達的關鍵。需要考慮以下方面的因素，包括：目標蛋白性質、用途、蛋白質產量和成本。此外，許多蛋白質表達項目也存在著風險，尤其是大蛋白、膜蛋白、核蛋白和具有大量翻譯后修飾的蛋白質。 目前卡梅德生物可以提供幾種表達系統可供客戶選擇，不同的系統有不同的特性和應用
重組蛋白表達系統
選擇合適的蛋白表達系統是重組蛋白成功表達的關鍵。需要考慮以下方面的因素，包括：目標蛋白性質、用途、蛋白質產量和成本。此外，許多蛋白質表達項目也存在著風險，尤其是大蛋白、膜蛋白、核蛋白和具有大量翻譯后修飾的蛋白質。 目前卡梅德生物可以提供幾種表達系統可供客戶選擇，不同的系統有不同的特性和應用
哺乳動物細胞中進行RNA干擾:設計，實驗和分析siRNA效應
?轉錄后基因沉默，也稱為RNA干擾，是指雙鏈RNA分子阻斷或者降低同源基因的表達的現象。這種現象可能是作為一種抑制病毒感染和轉座子跳躍的細胞防御機制(Ketting et. al., 1999; Tabara et. al., 1999; Jensenet. al., 1999; Ratcliff
DNA重組（DNA－recombination）技術：DNA重組與鑒定2
（1）CaCl2處理以后的轉化: 當細菌處于0℃、二價陽離子（如Ca2+、Mg2+等）低滲溶液中時，細菌細胞膨脹成球形，處于感受態；此時轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附于細胞表面，重組DNA在42℃短時間熱沖擊后吸附在細胞表面，在豐富培養基中生長數小時后，球狀細胞恢復原
重組蛋白制備工藝優化策略
重組蛋白純化基本原則蛋白的分離純化是生物工程下游階段一個比較重要的部分，尤其在基因工程重組蛋白的分離純化中，上游過程的許多因素會直接影響到下游蛋白的分離，充分利用上游對下游的影響，對蛋白的純化做一個全面的考慮和整體的設計。是否帶有親和標簽，His標簽，GST標簽等，不同的親和標簽選擇不同的純化方案；
植物生物反應器的國內基礎
上述研究項目在立項前均已進行了ZL查新工作，所涉及的基因、植物、外源基因轉移方法和高效植物表達載體的構建等關鍵技術有自己的獨創性。從事“863”計劃和計劃以外其他國內單位和個人為此都申請了國家發明ZL，因此，這些研究成果擁有我國自主的知識產權。通過“九五”的探索性研究，進一步縮短了我國與世界先進國家
幾種蛋白表達系統優缺點分析
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性不同，適合表
幾種蛋白表達系統優缺點分析
蛋白表達是指用模式生物如細菌、酵母、動物細胞或者植物細胞表達外源基因蛋白的一種分子生物學技術。蛋白表達系統是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過這個體系可以實現外源基因在宿主中表達的目的。 1、宿主。表達蛋白的生物體。可以為細菌、酵母、植物細胞、動物細胞等。由于各種生物的特性
動物細胞基因組DNA的制備
實驗概要本實驗介紹了動物細胞基因組DNA的制備原理及操作流程。本方法一般可從5×107培養的非整倍體細胞（如HeLa細胞）中獲得大約200μg DNA。DNA的長度可達到100~150kb。20ml正常血的DNA產量約為250μg。實驗原理真核生物的一切有核細胞（包括培養細胞）都能用來制備基因組 ?
選擇重組蛋白表達的合適方法
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
真核細胞表達系統的類型與常用真核細胞表達載體
原核表達系統是常被用來研究基因功能的成熟系統，由于原核表達系統具有包涵體蛋白不易純化、蛋白修飾不完整等缺陷，人們也開始利用真核細胞表達系統來研究基因。自上世紀70年代基因工程 技術誕生以來，基因表達技術已滲透到生命科學研究的各個領域。并隨著人類基因組計劃實施的進行，在技術方法上得到了很大發展，時至今
腺病毒包裝技術的簡介
腺病毒（Adenovirus）是最高效可靠的重組病毒表達系統之一，可用于在哺乳細胞中瞬時及高水平地表達shRNA或目的蛋白。其具備以下優點： 1. 宿主范圍廣。腺病毒可感染一系列哺乳動物細胞，除可感染幾乎所有人的細胞類型外，還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。 2. 因
真核細胞表達系統2
在病毒感染晚期，由于大量外源蛋白的表達引起昆蟲細胞的裂解，胞質內的物質釋放出來，與 目的蛋白混在一起，從而使蛋白的純化工作變得很困難，另外水解酶的釋放會降解重組蛋白。為了克服以上這些困難，科學工作者先后嘗試用絲蛾肌動蛋白基因啟動子或桿狀病毒ie-1基因啟動子表達外源蛋白，但效果都不明顯。Farr
哺乳動物細胞的實驗室的培養器皿
常用細胞培養器皿有培養瓶、培養板、培養皿等。常準備量是使用量的三倍。器 皿應選擇透明度好、無毒、利于細胞粘附和生長的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品 或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面幾種。 （1）液體儲存瓶：用于儲存各種配制好的培養液、血清等液體，常用規格有500ml、250ml、
選擇重組蛋白表達的合適方法
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
選擇重組蛋白表達的合適方法（三）
五、哺 乳 動 物 細 胞以前通常認為哺乳動物表達方法是重組蛋白表達效率最低的方法。然 而 ，最近的研究進展已經極大地提高了哺乳動物細胞系的表達水平(詳 見 第 15章)。例如, 有報道稱利用穩定轉染的中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary,C H O )細胞，重組抗體的表
新載體大大提升哺乳動物細胞的蛋白產量
科學家們用細胞系或細菌表達外源蛋白已經有三十多年歷史了，這些技術已經在絕大多數實驗室得到了普及。然而，像新藥開發這樣的應用需要大批量的蛋白，現有的表達體系難以勝任。日前研究人員在Nucleic Acids Research雜志上發表文章，展示了一類新型的重組蛋白表達載體。這種載體可以克服表觀遺傳
醫學資料筆記2－基因的轉移和重組
細菌間基因的轉移與重組是發生遺傳性變異的重要原因之一。DNA可以從一種生物轉移至另一生物，整合至染色體，改變其遺傳信息的組成，這類基因轉移的方式稱之為基因水平轉移。這類遺傳物質的交流可發生在親緣、遠緣，甚至無親緣關系的生物之間。根據DNA片段的來源及交換方式等不同，將基因轉移和重組分為轉化、轉導
細菌基因轉移與重組的方式有哪些？
1.接合作用：當細菌與細菌相互接觸時，質粒DNA就可從一個細菌轉移到另一個細菌。2.轉化作用：由外源性DNA導入宿主細胞，并引起生物類型改變或使宿主細胞獲得新的遺傳表型的過程，稱為轉化作用。3.轉導作用：當病毒從被感染的細胞釋放出來，再次感染另一細胞時，發生在供體細胞與受體細胞之間的DNA轉移及基因
哺乳動物精核的制備實驗
實驗材料哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟1. 培養并收獲 3L 1×106?細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 20 倍于沉淀體積（40
哺乳動物精核的制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 哺乳動物組織培養細胞（如 HeLa 細胞）試劑、試劑盒 PBS裂解緩沖液緩沖液 B儀器、耗材 帶有 B 型研磨棒的杜恩斯勻漿器光學顯微鏡實驗步驟 1. 培養并收獲 3L 1×106 細胞/ml 的哺乳動物組織培養的細胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗兩次。2. 用 2
基因轉移的物理方法轉移法介紹
包括顯微鏡注射法、電脈沖介導法。顯微注射法是應用特別的玻璃顯微注射器在顯微鏡下把重組DNA導入靶細胞；電脈沖介導法又稱電穿孔法，是指在高壓電脈沖的作用下，使細胞膜上出現瞬間微小的孔洞，從而介導不同細胞之間的原生質膜發生融合，使外源DNA通過細膜上出現的瞬間小孔而進入細胞。
瞬時轉染分析法
摘要： 介紹5種瞬時轉染分析法：瞬時轉染分析法、穩定轉染分析法、體外轉錄分析法、轉基因分析法和同源重組分析法. 1.瞬時轉染分析法 目前有很多功能性分析方法用于研究轉錄調控,最常用的方法是瞬時轉染分析法.該方法是通過一定的轉染程序將含目的調控區