用纏繞法從哺乳動物細胞中分離DNA
實驗方法原理本方法由 Bowtell 法（1987) 改進而成，可同時從許多不同細胞或者組織樣品中制備 DNA。本方案中的主要步驟包括將 DNA 沉淀在細胞裂解液和乙醇的交界面上，接著將沉淀的 DNA 纏繞到一個 Shepherd 氏鉤上。纏在鉤上的 DNA 從乙醇溶液中轉出溶于所選擇的液體緩沖液。這種收集高分子質量 DNA 沉淀的方法首次用于 20 世紀 30 年代。小片段 DNA 和 RNA 不能有效地整合入凝膠狀纏繞物。這些 DNA 往往太小（約 80 kb)，不能用于構建基因組 DNA 文庫，但用于 Southern 雜交和聚合酶鏈反應則效果甚佳，也可用限制性內切核酸酶部分酶解后用于構建按大小進行分級的文庫。1 ml 培養的非整倍體哺乳動物細胞（2.0X107 個，如 HeLa 細胞）能產生 100 μg DNA。實驗材料λ 噬菌體的線性單體和多聯體哺乳類細胞、新鮮組織或血樣試劑、試劑盒細胞裂解液乙醇TE儀器、......閱讀全文
葉綠體DNA分離
設備：Hitachi CS-150GXL或CS-120GXL微量超速離心機，S100AT6 轉頭，5PA 密封管（如果用4PC管，可接比例減少各層液量）溶液配制：A液：0.35Msorbitol（山梨醇），50mM Tris—Hcl (PH8.0) 25mM EDTA—Na2B液：5％（w/w）So
DNA分離在什么時期
不可以，有絲分裂只有在間期才進行dna的復制，之后dna會隨著染色體運動，不再復制。
酵母DNA的快速分離
實驗方法原理 根據該方案制備的酵母 DNA 可以用作 PCR 反應的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能復制的穿梭質粒也可以從酵母中提取，并且可以用于轉化 E. coli。實驗材料 酵母細胞試劑、試劑盒 乙醇酚氯仿醋酸鈉STES 緩沖液TE儀器、耗材
酵母DNA的快速分離
根據該方案制備的酵母 DNA 可以用作 PCR 反應的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能復制的穿梭質粒也可以從酵母中提取，并且可以用于轉化 E. coli。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理根據該方案制備的酵母 DNA 可
酵母DNA的快速分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 根據該方案制備的酵母 DNA 可以用作 PCR 反應的模板。在 E. coli 和 Saccharomyces cerevisiae 中均能復制的穿梭質粒也可以從酵母中提取，并且可以用于轉化 E. coli。
SDS法分離植物DNA
實驗概要Dellaporta，Wood?和?Hicks (1983)?法分離植物總基因組DNA，通過實驗掌握SDS法從植物葉片提取DNA?的原理和方法。主要試劑提取緩沖液?[?詳細信息：100mM Tris.Cl,；50mM EDTA； 500mM Nacl；40mmol/L?巰基乙醇，隨用隨加。]
標本DNA的分離與純化
用5-10ml 1xNTE(NaCl 100mmol/L ,Tris-HCl 10mmol/l pH7.4，EDTa 1mmol/L pH8.0)調整細胞為2×107個（組織應切碎置液氮冰凍，高速攪切成粉末后，加入緩沖液）。加1/10-1/20體積（V）10mg/ml蛋白酶（Sigma Ⅷ型），
PCR擴增分離目的DNA片段
一、目的了解多聚合酶鏈反應DNA 擴增技術的基本原理和實驗應用，掌握PCR反應基本技術。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶鏈式反應是1986 年由Kallis Mullis 發現。這項技術已廣泛地應用于分子生物學各個領域，它不僅可用于基因分離克隆和核酸序列分
小量培養物中分離－BAC－DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 小量 BAC DNA 是從 5 ml BAC 轉化細胞培養物中制備的。DNA 的制備采用堿裂解法。BAC DNA 的產量可達 0.1~0.4? μg，足夠用于限制酶切分析、PCR 或 Southern 印跡。
大量培養物中分離－BAC－DNA
BAC 重組子的精細分析，包括詳細的限制酶切圖譜、DNA 測序或亞克隆，所需 DNA 量都超過小量制備所能提供的量。本方案的制備流程適用于重組 BAC 的大規模培養物。500 ml BAC 轉化菌的平均產量為 20~25 μg BAC DNA。還可用柱層析對 DNA 產物進一步純化。本實驗來源「分子
小量培養物中分離－BAC－DNA
實驗方法原理 小量 BAC DNA 是從 5 ml BAC 轉化細胞培養物中制備的。DNA 的制備采用堿裂解法。BAC DNA 的產量可達 0.1~0.4 ?μg，足夠用于限制酶切分析、PCR 或 Southern 印跡。實驗材料 限制性內切核酸酶大腸桿菌試劑、試劑盒 乙醇異丙醇DNA提取液堿性裂解
小量培養物中分離－BAC－DNA
小量 BAC DNA 是從 5 ml BAC 轉化細胞培養物中制備的。DNA 的制備采用堿裂解法。BAC DNA 的產量可達 0.1~0.4? μg，足夠用于限制酶切分析、PCR 或 Southern 印跡。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理小量 BAC DNA 是從 5
哺乳動物－DNA－的快速分離
根據本方案制備的哺乳動物 DNA 約 20~50 kb，適于作 PCR 反應的模板。DNA 產量在 0.5 到 3.0 μg/mg 組織之間變化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理根據本方案制備的哺乳動物 DNA 約 20~50 k
哺乳動物－DNA－的快速分離
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 根據本方案制備的哺乳動物 DNA 約 20~50 kb，適于作 PCR 反應的模板。DNA 產量在 0.5 到 3.0 μg/mg 組織之間變化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。
堿法分離質粒DNA的原理
現在質粒提取無論手提還是試劑盒，其根本原理大多還是堿裂解法：當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性 而呈絮狀，離心時可沉淀下來。進一步的質粒DNA獲取，手提是經過苯酚、氯仿抽
哺乳動物－DNA－的快速分離
實驗方法原理 根據本方案制備的哺乳動物 DNA 約 20~50 kb，適于作 PCR 反應的模板。DNA 產量在 0.5 到 3.0 μg/mg 組織之間變化，或者是 5~15 μg/300μl 全血。實驗材料 無 DNase 的 RNase蛋白酶 K哺乳動物組織或全血試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖液乙
質粒DNA的分離、純化和鑒定
材料、設備及試劑 一、材料 含質粒的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料離心管(又稱eppendorf管),離心管架。 二、設備 微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 臺式高速離心機，恒溫振蕩搖床， 高壓蒸汽消毒器(滅菌鍋)， 渦旋振蕩器， 電泳儀，瓊脂糖平板
大量培養物中分離－BAC－DNA
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 BAC 重組子的精細分析，包括詳細的限制酶切圖譜、DNA 測序或亞克隆，所需 DNA 量都超過小量制備所能提供的量。本方案的制備流程適用于重組 BAC 的大規模培養物。500 ml BAC 轉化菌的平均產量為 20~25 μ
大量培養物中分離－BAC－DNA
實驗方法原理 BAC 重組子的精細分析，包括詳細的限制酶切圖譜、DNA 測序或亞克隆，所需 DNA 量都超過小量制備所能提供的量。本方案的制備流程適用于重組 BAC 的大規模培養物。500 ml BAC 轉化菌的平均產量為 20~25 μg BAC DNA。還可用柱層析對 DNA 產物進一步
植物細胞葉綠體DNA的分離純化
實驗方法原理本實驗首先是制備植物新鮮組織勻漿、過濾,分離出完整的葉綠體,然后通過蔗糖密度梯度離心,把葉綠體與其他亞細胞結構分離開來。完整葉綠體經蛋白酶K酶解后,再通過酚-氯仿抽提獲得高純度的葉綠體DNA。實驗材料植物新鮮幼嫩葉片試劑、試劑盒緩沖液A(提取緩沖液)緩沖液B(裂解緩沖液)TE緩沖液蔗糖溶
堿法分離質粒DNA的原理
現在質粒提取無論手提還是試劑盒，其根本原理大多還是堿裂解法：當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性 而呈絮狀，離心時可沉淀下來。進一步的質粒DNA獲取，手提是經過苯酚、氯仿抽
堿法分離質粒DNA的原理
現在質粒提取無論手提還是試劑盒，其根本原理大多還是堿裂解法：當菌體在NaOH和 SDS溶液中裂解時，蛋白質與DNA發生變性，當加入中和液后，質粒DNA分子能夠迅速復性，呈溶解狀態，離心時留在上清中；蛋白質與染色體DNA不變性 而呈絮狀，離心時可沉淀下來。進一步的質粒DNA獲取，手提是經過苯酚、氯仿抽
植物細胞葉綠體DNA的分離純化
實驗方法原理 本實驗首先是制備植物新鮮組織勻漿、過濾,分離出完整的葉綠體,然后通過蔗糖密度梯度離心,把葉綠體與其他亞細胞結構分離開來。完整葉綠體經蛋白酶K酶解后,再通過酚-氯仿抽提獲得高純度的葉綠體DNA。實驗材料 植物新鮮幼嫩葉片試劑、試劑盒 緩沖液A(提取緩沖液)緩沖液B(裂解緩沖液)TE緩沖液
BAC－DNA分離方法－Isolation－of－BAC－DNA－from－Largescale－Cultures
Isolation of BAC DNA from Large-scale Cultures Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, Austral
脈沖場凝膠電泳制備DNA（酵母完整DNA的分離）
實驗方法原理 制備用于電泳的酵母 DNA，先用酶破壞酵母細胞胞壁，然后在熔化的低熔點瓊脂糖中混懸，制成栓。將栓浸入含蛋白酶的裂解緩沖液，以加速細胞裂解和除去蛋白質。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介紹的方法上略有改進，它可用于制備作為 高分子質量標準的酵母
脈沖場凝膠電泳制備DNA（酵母完整DNA的分離）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備用于電泳的酵母 DNA，先用酶破壞酵母細胞胞壁，然后在熔化的低熔點瓊脂糖中混懸，制成栓。將栓浸入含蛋白酶的裂解緩沖液，以加速細胞裂解和除去蛋白質。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介紹的
脈沖場凝膠電泳制備DNA（酵母完整DNA的分離）
制備用于電泳的酵母 DNA，先用酶破壞酵母細胞胞壁，然后在熔化的低熔點瓊脂糖中混懸，制成栓。將栓浸入含蛋白酶的裂解緩沖液，以加速細胞裂解和除去蛋白質。此方法在 Schwartz 和 Cantor (1984) 最初介紹的方法上略有改進，它可用于制備作為 高分子質量標準的酵母染色體和酵母人工染色體（Y
酵母遺傳學方法1：DNA分離
酵母DNA分離1）酵母DNA微量制備（40ml）1．在125ml三角瓶中用40ml YPD培養液在30℃條件下培養細胞達最大生長量（過夜）。2．將上述培養物移入螺蓋離心管，用醫用離心機或Sorvall SS－34轉頭以5000r/min離心5分鐘，棄去上清液。3．將細胞懸浮在3ml的0.9mol/L
質粒DNA的分離、純化和鑒定－（三）
操作步驟? 一、 細菌的培養和收集? 將含有質粒pBS的DH5α菌種接種在LB固體培養基（含50μg/ml Amp）中, 37℃培養12-24小時。用無菌牙簽挑取單菌落接種到5ml LB液體培養基（含50μg/ml Amp）中,37℃振蕩培養約12小時至對數生長后期。? 二、 質粒DNA
分離DNA和RNA主要方法有哪些
鹽析法 DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同 利用這一特點 選擇適當的鹽濃度就能使DNA充分溶解 而使雜質沉淀 或者相反 以達到分離目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后減小 在DNA溶解度最低時 DNA從溶液中析出 而其他雜質還留在溶液中 達到粗提取的目的酶水解法 采