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實驗材料大腸桿菌試劑、試劑盒氨芐青霉素LBPBSSDS甘油谷胱甘肽儀器、耗材離心機搖床轉子超聲波發生器實驗步驟1. 按正確讀框將DNA片段亞克隆入合適的pGEX載體中，轉化大腸桿菌感受態細胞， 在LB/氨芐青霉素平皿上篩選轉化子，以不插入外源DNA的自連載體作對照，平皿置37℃孵育12~15 h。 2. 挑取轉化菌落接種于2 ml LB/氨芐青霉素培養基，并在氨芐青霉素主平板上劃線培養。同時接種含母本pGEX載體的轉化菌作對照。將主平板于37℃下溫育12~15 h。液體培養物則于37℃搖床中振蕩培養，直至混濁。3. 加入100 mmol/l IPTG至終濃度0.1 mmol/l 誘導融合蛋白表達，繼續保溫培養1~ 2 h。 4. 將液體培養物移入一個作好標記的微量離心管中，室溫下以最高速度離心5 s，棄上清，沉淀用300 μl 冰浴預冷的PBS液重懸。取10 μ......閱讀全文
實驗步驟 一、設計具有標簽的蛋白質時需要考慮的因素 親和力和可溶性的選擇 在大腸埃布氏菌中生產外源蛋白時面臨兩個挑戰: 一? 是所用蛋白質表達系統的表達水平很低; 二是所表達的蛋白質被錯誤折疊進不溶性的聚集體—包涵體中。弱啟
研究者們在分離到某一基因后，要對其編碼蛋白質進行研究最理所當然的工作就是表達——即：有目的性地合成外源基因產物。在重組DNA技術的發展早期，人們認為在基因的前面有一個強啟動子和一個起始密碼子就足以在大腸桿菌中獲得很好的表達。隨后，認識到獲得有效的翻譯所需的條件要復雜得多，除了要有強啟動子
實驗步驟一、設計具有標簽的蛋白質時需要考慮的因素親和力和可溶性的選擇在大腸埃布氏菌中生產外源蛋白時面臨兩個挑戰: 一? 是所用蛋白質表達系統的表達水平很低; 二是所表達的蛋白質被錯誤折疊進不溶性的聚集體—包涵體中。弱啟動子、低轉錄起始或稀有密碼子的存在引起的表達問題都可以通過在裝配過表達質粒時將矯正
重組蛋白是研究生物學過程的重要工具。需要使用表達系統來對其進行制備。合適表達系統的選擇取決于重組蛋白的特性、重組蛋白的預期應用以及該系統能否生產足夠量的蛋白質。作者： 伯吉斯等,主譯：陳薇，本實驗來自「蛋白質純化指南」實驗步驟一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及
實驗步驟 一、引言 選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或
pGEX 載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽 S 轉移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料表達 GST 融合蛋白的大腸桿菌細胞試劑、試劑盒二硫蘇糖醇谷胱甘肽洗脫緩沖液磷酸緩沖鈉鹽溶液Tri
實驗概要本實驗介紹了谷胱甘肽瓊脂糖凝膠的使用方法。Pgex載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉移酶溶合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。Pgex是一類以谷胱甘肽(γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸)作為底物，通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對底物的親和力是亞豪摩爾級的，因此谷胱甘肽
一、設計具有標簽的蛋白質時需要考慮的因素親和力和可溶性的選擇在大腸埃布氏菌中生產外源蛋白時面臨兩個挑戰: 一? 是所用蛋白質表達系統的表達水平很低; 二是所表達的蛋白質被錯誤折疊進不溶性的聚集體—包涵體中。弱啟動子、低轉錄起始或稀有密碼子的存在引起的表達問題都可以通過在裝配過表達質粒時將矯正
利用重組技術將探針蛋白與GST（Glutathione S transferase）融合，融合蛋白通過GST與固相化在載體上的GTH（Glutathione）親和結合，已廣泛應用于分子生物學（1）證實兩種蛋白可能有相互作用（2）尋找能與已知蛋白發生相互作用的未知蛋白。實驗方法原理利用重組技術將探針蛋
（2）間接法：細胞→3％多聚甲醛固定和滲透化→封閉→針對蛋白的特異抗體→洗滌→熒光素標記的二抗→洗滌 → 熒光顯微鏡觀察或流式細胞計分析凋亡相關蛋白TFAR19蛋白的表達和細胞定位分析TFAR19（PDCD5）是由本研究室在國際上首先報導的一個擁有自己知識產權的人類新基因，前期的功能研究表明，它是促
四免疫組織化學技術原理：是指酶標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的成色反應，對相應的抗原進行定性、定位和定量測定的一項技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙的結合起來，借助顯微鏡（包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡等）的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質（如蛋
微陣列技術在單個實驗中能同時分析數千個參數。捕獲分子微點在固體支持物上固定成行列并暴露在含相應結合分子的樣品中。基于熒光、化學發光、質譜、放射性或電化學的讀出系統能檢測每個微點形成的復合物。這些微小化和平行的結合分析高度靈敏，方法的分析能力又能被微陣列基因表達分析所放大。在這些系統中，檢測固定的DN
近年來在原核表達體系中，谷胱甘肽S轉移酶GST表達純化系統的應用更為普遍，它的來源是日本血吸蟲的25kDa大小的GST蛋白。GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便，以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。G
有適合免疫沉淀IP的GST抗體嗎？近年來在原核表達體系中，谷胱甘肽S轉移酶GST表達純化系統的應用更為普遍，它的來源是日本血吸蟲的25kDa大小的GST蛋白。GST標簽系統具有蛋白表達產率高、表達產物純化方便，以及利于GST抗體制備等特點和優勢。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在
一、引言選 擇 合 適 醜 組 蛋 白 表 達 方 法 對 于 能 否 及 時 獲 取 所 需 數 量 和 質 量 的 重z組蛋白非常關鍵。選 擇 了 錯 誤 的表達宿主可 能 導 致 蛋 白 質錯 誤 折 疊 或 低 量 表 達 . 缺 少 必要的翻譯后 修 飾或不適當的修飾 。選 擇 表
GST 融合蛋白作為在細菌中表達的重組蛋白，從它們被介紹以來，已用于成千上萬個研究項目中（Smith and johnson 1988)。它們常常被用于制備抗體，這些抗體可用于研究蛋白質-蛋白質相互作用以及分析生化反應。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W
使用基因融合表達系統在大腸桿菌中表達外源基因已越來越受歡迎。其原因在很大程度上歸因于融合系統能夠產生大量的可溶性的融合蛋白。谷胱甘肽轉移酶以及硫氧還蛋白均被證實能非常成功地生產正確折疊、有生物活性的蛋白質。其中每一種都備有方便的純化方法，可將融合蛋白與細胞污染物分開。所產生的蛋白質適用于進行其生物學
實驗材料 帶有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的適于轉化的大腸桿菌菌株 IPTG 誘導的表達載體
本方案將在疑難解析和誘導啟動子表達蛋白的優化部分討論影響質粒表達效率的因素。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的適于轉化的大腸桿菌菌株IPTG 誘導的表達載體試劑、試劑盒考馬斯亮藍染色溶液或
實驗材料 帶有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的適于轉化的大腸桿菌菌株IPTG 誘導的表達載體試劑、試劑盒 考馬斯亮藍染色溶液或銀染溶液IPTGSDS 凝膠加樣緩沖液SDS-聚丙烯酰胺凝膠靶基因或 cDNA 片段LB 瓊脂平板LB 培養基儀器、耗材 SorvallGSA 轉頭或相當的轉頭沸水