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臍帶和臍血來源干細胞的培養實驗_從臍靜脈分離干細胞

實驗材料臍帶試劑、試劑盒膠原酶培養基儀器、耗材導管實驗步驟(a)在正常分娩后6?12h內收集和處理臍帶。(b)在臍靜脈內插入導管，用PBSA完全地洗2次。(c)夾住遠端臍帶。(d)用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈。(e)夾住近端臍帶。(f)將臍帶在37℃孵育20min。(g)輕輕按摩臍帶，收集含有內皮和內皮下層細胞的懸浮液，600g離心10min。(h)用培養基重懸細胞。(i)計數后，按1×103個細胞/cm2的密度將細胞接種到75cm2的培養瓶中。(j)3天后更換培養基，除去未貼壁細胞，保留貼壁的細胞繼續培養，每3天更換一次新鮮培養基，至大約2周后可見成纖維樣細胞生長。(k)在這種情況時，用0.05%胰蛋白酶/EDTA收集細胞，傳代到新培養瓶中繼續擴增。展開......閱讀全文