WIKI資訊
實驗材料線性化轉移基因 DNA未分化 ES 細胞儀器、耗材電穿孔儀和電穿孔杯neoR-MEF 滋養板ES 生長培養基實驗步驟1. 準備下列試劑和材料：線性化轉移基因 DNA（1 mg/ml，溶于無菌 TE）未分化 ES 細胞Bio-Rad 電穿孔儀和電穿孔杯100 mm neoR-MEF 滋養板ES 生長培養基含 300 μg/ml G418 的 ES 生長培養基2. 收獲未分化 ES 細胞，以 107 /ml 懸于 ES 生長培養基。3. 吸取無菌 DNA 加入電穿孔杯。加入 0.8 ml ES 細胞，輕輕吹吸混合，不要產生氣泡。4. 室溫電穿孔 DNA/細胞混合物：250 μF，0.3 kV。5. ES 生長培養基 1:10 稀釋電穿孔細胞，接種 neoR-MEF 滋養層，密度為 106 細胞/100 mm 滋養板。放于 37℃ 濕潤的 5% CO2 溫箱。6. 接種 48 小時后，換含 300......閱讀全文
1、確定目標對象：也就是你所有轉的目的物是什么東西？ 細胞系和細胞類型 細胞類型包括人類、哺乳動物、細菌、植物、藻類、霉菌、寄生蟲等 細胞系包括CHO, COS, Jurkat, Saccharomyce