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實驗材料細胞試劑、試劑盒溶解緩沖液RNA 酶A T1 混合液蛋白酶 KDNA 加樣緩沖液儀器、耗材Eppendorf 管移液管瓊脂糖凝膠實驗步驟1. 將 5X105 細胞移入無菌的 1.5 ml Eppendorf 管中，4℃ 2000 r/min 離心 5 分鐘，棄上清。2. 加入 20 μl 溶解緩沖液。用移液管尖頭混勻細胞沉淀。3. 加 10 μl RNA 酶A/T1 混合液，輕彈管尖混勻，不要形成旋渦。37℃ 孵育 30~120 分鐘。4. 加 10 μl 蛋白酶 K，輕彈管尖混勻，50℃ 孵育至少 90 min，也可過夜。5. 加 5 μl 6X DNA 加樣緩沖液，在含 0.5 μg/ml 溴化乙錠 TAE 的 1%~1.5% 瓊脂糖凝膠于孔中加 DNA 樣品。6. 低電壓電泳，可以促進 DNA 片段的分離。7. DNA 序列梯最后有紫外光顯示，攝影。凋亡細胞形成明顯的 DNA 梯度，而壞死細胞為不清晰的成......閱讀全文
2.3 蛋白質分析 為了分析AAV Rep和Cap蛋白質表達，按照2.2部分所述進行質粒轉染。轉染后48小時，將培養物刮到冷PBS/Mg(PBS含有5mM MgCl2)，細胞低速離心沉淀收獲。細胞沉淀在冰上用200ml STM-NP緩沖液(25mM蔗糖,10mM Tr
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板
PCR反應體系與反應條件 標準的PCR反應體系： 10×擴增緩沖液 10ul 4種dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～1
對有希望的基因組或 cDNA 克隆的分析，通常開始于用限制酶消化 λ 噬菌體 DNA 的小量制備物，并對消化產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。所獲得的 DNA 可用作限制酶的底物、RNA 合成（由噬菌體 SP6、T3 和 T7 編碼的依賴于 DNA 的 RNA 聚合酶來完成）的模板以及 PCR 的模板。本
一、Southern雜交 Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。 (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。&
動物總RNA的提取與電泳 I． 實驗目的與要求 A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。 B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。 II． 實驗原理和背景知識 A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物
動物總RNA的提取與電泳I．實驗目的與要求A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。II． 實驗原理和背景知識A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物大分子，如mRNA,它攜帶了DNA的全部編碼信息。
（一）藥物對腫瘤細胞的抑制效應的MTT法：用培養基將腫瘤細胞調整至2 X108個/L，在96孔板中每孔加入100ul細胞懸液于37℃、5% CO2下培養過夜。次日每孔加入不同濃度的藥物100mg/L作為試驗組，設加完全培養基不加藥物的陰性對照，并用功能明確的藥物為陽性對照和0.5%的乙醇溶劑對照，每
試劑、試劑盒 緩沖液、溶液和試劑 生物分子 酶和酶緩沖液 核酸和寡核苷酸 凝膠
常見問題PCR產物的電泳檢測時間一般為48h以內，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚至消失。假陰性，不出現擴增條帶。PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及， ④PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中
這一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法（Blin and Stanfford 1976)。 當需要大量哺乳動物 DNA，如用于 Somhern 雜交或者用噬菌體 λ 載體構建基因組文庫時，應選用這一方法。從 5X107 培養的非整倍體細胞 ( 如 HeLa 細
實驗材料 帶 mutS 表型（例如 BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態 帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態
實驗方法原理 這一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法（Blin and Stanfford 1976)。 當需要大量哺乳動物 DNA，如用于 Somhe
實驗材料 大腸桿菌菌株 HB101 質粒 pSPL3COS-7 細胞載體 pBluescriptⅡ大腸桿菌 DH5α試劑、試劑盒 pSPL3 多克隆位點圖譜限制性內切核酸酶PvuⅡT4DNA 連接酶LB 瓊脂平板黏粒載體TESOC 培養基瓊脂糖凝膠LB 肉湯培養基PBS胰酶-EDTA 溶液D
PCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引
細胞凋亡試驗常用的方法（MTT法、熒光法、DNA瓊脂糖凝膠電泳法與流式細胞儀檢測法）（一）藥物對腫瘤細胞的抑制效應的MTT法：用培養基將腫瘤細胞調整至2 X108個/L，在96孔板中每孔加入100ul細胞懸液于37℃、5% CO2下培養過夜。次日每孔加入不同濃度的藥物100mg/L作為試驗組，設加完
本方案以哺乳動物穿梭載體 pSPL3 為例，描述了外顯子擴增的方法，內容分為以下五個階段。階段 1: 文庫的構建; 階段 2: 電穿孔法將文庫轉染 COS-7 細胞; 階段 3:mRNA 的提取; 階段 4: 反轉錄 PCR; 階段 5: 克隆分析。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）上冊，作者：
實驗材料 帶 mutS 表型（例如BMH71-18) 的轉化用大腸桿菌感受態帶 mut+表型的轉化用大腸桿菌感受態試劑、試劑盒 退火緩沖液貯存液合成緩沖液噬菌體 T4DNA 連接酶噬菌體 T4DNA 聚合酶或測序酶單一位點的限制性內切核酸酶瓊脂糖凝膠誘變引物選擇引物質粒 DNA儀器、耗材 70°C
實驗方法原理 這一程序改自最先由 Daryl Stafford 及其同事描述的方法（Blin and Stanfford 1976)。 當需要大量哺乳動物 DNA，如用于 Somhern 雜交或者用噬菌體 λ 載體構建基因組文庫時，應選用這一方法。從 5X107 培養的非整倍體細胞 ( 如
實驗方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化細胞和組織，用高濃度甲酰胺分離 DNA-蛋白質復合物（染色質用火棉膠袋充分透析去除
階段 5:SepharseCL-4B 凝膠過濾法分離 cDNA材料緩沖液和溶液乙醇乙酸鈉（3 ml/L,pH5.2)TE(pH7.6)含 0.1mol/LNaCl 的 TE(pH7.6)Tris-HCl(1mol/L,pH8.0)凝膠瓊脂糖凝膠（1%)見步驟 8。核酸和寡核苷酸cDNA階段 4 中步
實驗方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化細胞和組織，用高濃度甲酰胺分離 DNA-蛋白質復合物（染色質用火棉膠袋充分透析去除蛋白酶和有機溶劑等過程。甲酰胺是一種離子化溶劑，能分離蛋白質-DNA 復合物并使蛋白變性和釋放，但他并不明顯影
本方案描述了通過 PCR 擴增產物，來制作 cDNA 微陣列的實驗步驟。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒緩沖液、溶液和試劑生物分子酶和酶緩沖液核酸和寡核苷酸凝膠儀器、耗材專用設備實驗步驟第 1 階段：影印鋪板與工作庫的制備一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑羧芐
實驗概要本實驗介紹了單細胞凝膠電泳標準操作流程。實驗原理在細胞核中，DNA是環狀附著在核基質上，細胞裂解過程中，核基質被溶解、抽提，DNA的結構則未發生變化。如果DNA鏈上存在缺口，則使DNA超螺旋變的松弛，DNA環向外展，同時由于暴露了陰電荷，在電場力的作用下，松動的DNA環向陽極遷移，但是由于這
實驗概要本實驗包括大腸桿菌質粒DNA的提取，質粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定，大腸稈菌感受態細胞的制備及質粒DNA高頻轉化大腸桿菌。實驗步驟1. 大腸桿菌質粒DNA的提取堿裂解法：此方法適用于小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：
本方法中，兩條寡核苷酸引物雜交到變性重組質粒 DNA 雙鏈的同一條鏈上。一條引物（誘變引物）攜帶一個擬引進靶 DNA 序列的突變，第二條引物攜帶一個能破壞質粒單一限制酶位點的突變。本實驗來源于分子克隆實驗指南（第三版）下冊，作者：〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。實驗材料帶 mutS 表型（
利用PCR分析酵母菌落 實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵
本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化細胞和組織，用高濃度甲酰胺分離 DNA-蛋白質復合物（染色質用火棉膠袋充分透析去除蛋白酶和有機溶劑等過程。甲酰胺是一種離子化溶劑，能分離蛋白質-DNA 復合物并使蛋白變性和釋放，但他并不明顯影響蛋白酶 K 的活性。本實
一、實驗目的 通過本實驗學習從植物組織中提取RNA的方法 二、實驗原理 RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的 RNA，必須最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。高濃度強變性劑異硫氰酸胍，可溶解蛋白質，破壞細胞結構，使核蛋白與核酸分離，失活RNA酶，所以RNA
實驗方法原理 用 PCR 分析酵母菌落時，無需純化 DNA。本方案以單個酵母菌落的粗裂解液作為 PCR 擴增的模板，來確定 YAC 中是否攜帶目的 DNA 序列。實驗材料 Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 標準參照物YAC 重組子的酵母菌株試劑、試劑盒 PCR 緩沖液dNTP 溶液儀器、耗材