動物總RNA的提取與電泳 I. 實驗目的與要求 A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。 B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。 II. 實驗原理和背景知識 A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物大分子,如mRNA,它攜帶了DNA的全部編碼信息。RNA的分離是研究基因功能的重要基礎之一,在分子生物學中占有重要的地位。提取的mRNA可用于Northern blot、RT-PCR、構建 cDNA文庫、Gene Chips以及體外翻譯等實驗。 B. 本次試驗中,由于RNase極穩定,所以,在操作RNA時,要格外仔細,以防RNA被降解。在提取RNA之前,必須對所用器皿進行RNase滅活處理。如用180oC干烤8小時以上處理玻璃器皿,或用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡玻璃器皿和其它用品。所用水以及相關的緩沖液也需要......閱讀全文
動物總RNA的提取與電泳 I. 實驗目的與要求 A. 理解和掌握提取和純化動物總RNA的技術原理和操作方法。 B. 理解和掌握通過電泳鑒定提取所得的動物總RNA的技術原理和操作方法。 II. 實驗原理和背景知識 A. RNA是生命活動中基因表達過程非常重要的生物
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RNA標記是將標記物(如放射性同位素、熒光素或酶)共價地連接到RNA,通過檢測標記物,進而實現對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標記在分子探針領域應用廣泛,在疾病診斷方面也很有前景。 理想的RNA標記方法應符合以下要求: 1. 操作簡單,靈敏度高 2. 不影響堿基配對的特異性
RNA提取試劑的選擇RNA提取對于科研人員來說并不陌生,但是要得到好的結果卻不是一件很容易的事情。事實上,現在市面上的豐富的RNA提取試劑基本上可以滿足科研人員的需要,為什么往往提取的RNA卻容易失敗呢?RNA提取失敗的主要現象有三個:提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA純度低。究竟
RNA標記RNA標記是將標記物(如放射性同位素、熒光素或酶)共價地連接到RNA,通過檢測標記物,進而實現對RNA鑒別和檢測的目的。RNA標記在分子探針領域應用廣泛,在疾病診斷方面也很有前景。 理想的RNA標記方法應符合以下要求:1. 操作簡單,靈敏度高2. 不影響堿基配對的特
一、聚胺法分離染色質 試劑、試劑盒:秋水仙胺、聚胺緩沖液 實驗步驟: 有絲分裂中細胞的同步化 1. 37℃,用合適的含有 FCS,抗生素和其他必要成分的培養基培養細胞。 2. 收集有絲分裂細胞前 10~16 小時在培養基中以 0.06 μg/ml 的
實驗目的 研磨破碎軟骨組織(大鼠膝關節軟骨),提取其總RNA。 實驗原理 充分磨碎軟骨樣品(大鼠膝關節軟骨),再用相關試劑提取
銳賽小課堂1222-158 一、貼壁細胞蛋白提取 A 1..將水浴鍋的溫度調至100℃,等水浴鍋達到100℃溫度后,取出需要收樣的細胞的培養皿或者孔板。 2.將緩沖液(1Xloading buffer)置于100℃水浴鍋中預熱10min。 (loding buffe
完整RNA 的提取和純化,是進行RNA 方面的研究工作,如Nothern雜交、mRNA 分離、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及體外翻譯等的前提。所有RNA的提取過程中都有五個關鍵點,即1):樣品細胞或組織的有效破碎;2),有效地使核蛋白復合體變性;3),對內源RNA酶的有效抑制;4)
一、原理RNA包括rRNA、tRNA和mRNA等,大部分通常是以核蛋白復合物的形式存在的。通過SDS、苯酚處理使蛋白質變性并沉淀。利用LiCl溶解雙鏈DNA的特性去除DNA,經乙醇沉淀得到總RNA。純度高、完整性好的RNA,即可用于Northern雜交、純化mRNA、cDNA合成和體外翻譯等進一步的