人胚胎干細胞系:衍生與培養—小鼠胚胎飼養細胞的制備
實驗步驟2.3 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞（MEF) 的 制 備最廣泛地用于支持 h E S 的伺養層細胞來自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎飼養細胞（MEFs) ，盡管它們可能是最原始的間葉細胞的前體細胞。每一 種 h E S 細胞系在不同的詞養層細胞上的生長可能不同，這點要注意，對于高效率的增殖有些飼養層細胞比另外一些細胞更合適，通常要傳 5?10代以確保細胞適應于新的伺養細胞。始終要做到只要細胞培養標準條件改變，就要對細胞的核型穩定性和多能性進行嚴格的核查。方 案 2. 1 介紹了原代 M E F 細胞的分離培養。2.3.1 原代培養小鼠胚胎飼養細胞能夠從妊娠〗15.5 —— 16.5 天 的 小 鼠 胚 胎（E15.5?E 16.5 ) 中分離出來，培養過程易于生長，是一種可靠的、持 續 的 飼 養 細 胞 的 來 源 ......閱讀全文
人胚胎干細胞系:衍生與培養—小鼠胚胎飼養細胞的制備
實驗步驟2.3 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞（MEF) 的 制 備最廣泛地用于支持 h E S 的伺養層細胞來自小鼠胚胎 [丁]^〇 1113 〇 1161&1,， 1998;Reu-binoffetal. ， 2000]，如小鼠胚胎飼養細胞（MEFs) ，盡管它們可能是最原始的間葉細胞的前體細胞
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗—人胚胎干細胞系的建立
實驗步驟方 案 2. 6 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立試劑與材料無菌或無菌制備□ 5?6 天的人胚泡，經 H F E A 允許，并且像先前討論的完全經病人同意。 HFEA所要求的全部細節能夠在 H E F A 的網站找到（http//:www.hfea.g0v.uk)。□鏈霉蛋白酶， 0
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗
細 胞 培 養 基 成 分 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞（MEF) 的 制 備 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立 h E S 細 胞 的 手 工 傳 代 采 用 玻 璃 化 方 法 凍 存 h E S 細胞 通 過 焚 光
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗
細 胞 培 養 基 成 分 小 鼠 胚 胎 飼 養 細 胞（MEF) 的 制 備 人 胚 胎 干 細 胞 系 的 建 立 h E S 細 胞 的 手 工 傳 代 采 用 玻 璃 化 方 法 凍 存 h E S 細胞 通 過 焚 光
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗——hES 細胞的手工傳代
實驗步驟方 案 2.7 h E S 細 胞 的 手 工 傳 代試劑與材料無菌或無菌制備□ 生 長 于 M E F 之上的未分化的 h E S 細胞集落□ 新 鮮 的 M E F 板（最好是在失活處理后 1?3 天內）□ h E S 培 養 基（見 2. 2. 1 節）□ 50 ul加樣器槍頭□玻璃巴
人胚胎干細胞:衍生與培養實驗—由hES細胞產生胚胎樣小體
實驗步驟方 案 2. 14 由 h E S 細 胞 產 生 胚 胎 樣 小 體試劑與材料無菌或無菌制備□ 生 長 于 M E F s 之上的未分化的 h E S 細胞集落□ 加樣器，設置在 50ul□ 超 低 附 著 力 的 P e tri 培 養 皿（特 殊 包 被 過 的 皿 ，可 防 止 細
人胚胎干細胞系:衍生與培養—采用玻璃化方法凍存hES細胞
實驗步驟方 案 2. 9 采 用 玻 璃 化 方 法 凍 存 h E S 細胞試劑與材料無菌或無菌制備□ 生 長 于 M E F 飼養層之上的未分化的 h E S 細胞□ hES-HEPES 培 養 基（見 2. 2. 2. 1 節）□ 1 0 % 玻 璃 化 溶 液（見 2. 2. 2. 4 節）
人胚胎干細胞系:衍生與培養實驗——細 胞 培 養 基 成 分
實驗步驟2.2.5 BRL-條件培養基B R L 細胞在大鼠肝細胞培養基（BRL-CM) 中生長至匯合，用新鮮培養基更換一次 ， 3 天后收集這些培養基。所有培養基用無菌的、孔 徑 0.2um 的 P E S 濾膜過濾，特別是來自其他細胞類型的條件培養基。應該注意的是：在細胞分化研究中可能被用到的生
小鼠胚胎干細胞的培養
實驗概要了解小鼠胚胎干細胞的培養方法。主要試劑1. 貯存液 DMEM(高糖) 胎牛血清 L-谷氨酰胺（200mM） MEM NEAA（10mM） HEPES（1M） β-巰基乙醇（55Mm） 轉鐵蛋白50mg/ml 胰島素5mg/ml 亞硒酸鈉300μM 黃體酮（20μM） 腐
小鼠胚胎干細胞的培養
完全培養基: 高糖DMEM (GIBCO 12430); 15%胎牛血清(BIOCHROM S0615); 0.1 mmol/L非必需氨基酸(GIBCO 11140-050); 2 mmol/L谷氨酰胺(GIBCO 25030); 0.1 mmol/L β-巰基乙醇(GIBCO 21985); 1