從果蠅胚胎中純化核心組蛋白實驗
實驗材料0～12 h 果蝸胚胎試劑、試劑盒脫色洗液胚胎洗液緩沖液 B緩沖液 ANaOHCaCl2EDTASDSNaCl氯仿 異戊醇T50E4 緩沖液核心組蛋白儲存液儀器、耗材羥磷灰石樹脂BCA 分析試劑盒細尼龍網Yamato LH－21 勻漿器Beckman 超速離心機MWCO 透析管實驗步驟1. 實驗前準備：1.1 材料0～12 h 果蝸胚胎1.2 試劑脫色洗液：50％（V/V）家用漂白劑的蒸餾水溶液胚胎洗液：0.7％（m/V）NaCl/0.04％（V/V）Triton X－100緩沖液 B緩沖液 A1 mol/L NaOH0.1 mol/L CaCl27200 U/ml 微球菌核酸酶儲液10 mmol/L 和 500 mmol/L EDTA10％（m/V）SDS5 mol/L NaCl24：1 （V/V） 氯仿/異戊醇線形 5％～30％ 蔗糖梯度T50E4 緩沖液：50 mmol/L Tris·Cl（pH 7.9）......閱讀全文
從果蠅胚胎中純化核心組蛋白實驗
實驗方法原理 實驗材料 0～12 h 果蝸胚胎 試劑、試劑盒 脫色洗液胚胎洗液緩沖液 B緩沖液 ANaOH CaCl2 EDTA SDSNaCl氯仿 異戊醇T50E4 緩沖液核心組蛋白儲存液 儀器、耗材 羥磷灰石樹脂BCA 分析試劑盒細尼龍網Yamato LH－21 勻漿器Beckman
從果蠅胚胎中純化核心組蛋白實驗
實驗材料0～12 h 果蝸胚胎試劑、試劑盒脫色洗液胚胎洗液緩沖液 B緩沖液 ANaOHCaCl2EDTASDSNaCl氯仿 異戊醇T50E4 緩沖液核心組蛋白儲存液儀器、耗材羥磷灰石樹脂BCA 分析試劑盒細尼龍網Yamato LH－21 勻漿器Beckman 超速離心機MWCO 透析管實驗步驟1.
羥磷灰石層析法純化核心組蛋白實驗
實驗材料精核試劑、試劑盒HAP 緩沖液BioGel HTP 粉（Bio－Rad）Bio－Rad 蛋白定量系統（可選）儀器、耗材2 cm×15 cm 柱及附件 Centriprep－10 濃縮器（Amicon； 可選）實驗步驟1. 用 25 ml HAP 重懸約 2 ml 精核（約含有 6 mg DN
羥磷灰石層析法純化核心組蛋白實驗
實驗方法原理 實驗材料 精核試劑、試劑盒 HAP 緩沖液BioGel HTP 粉（Bio－Rad）Bio－Rad 蛋白定量系統（可選）儀器、耗材 2 cm×15 cm 柱及附件 Centriprep－10 濃縮器（Amicon； 可選）實驗步驟 1. 用 25 ml HAP 重懸約 2 ml 精核（
純化RNA實驗——從組織中純化總RNA
實驗材料組織試劑、試劑盒RNA 抽提緩沖液氯仿實驗步驟1. 從動物取下組織，直接進行第 2 步或在液氮中快速冷凍新鮮解剖的組織。冷凍后的組織可以貯存在 -70℃。2. 組織（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提緩沖液中勻漿。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均勻，冰浴 15 分鐘
從果蠅胚胎中提取總－RNA－或－poIy(A)－+RNA
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 0.lmol LNaOH ?乙醇 ?3mol L 乙酸鈉 ? 苯酚 ?無 SDS 的結合緩沖液 含 SDS 的結合緩沖
從果蠅胚胎中提取總－RNA－或－poIy(A)－+RNA
試劑、試劑盒 0.lmol LNaOH 乙醇 3mol L 乙酸鈉 苯酚 無 SDS 的結合緩沖液 含 SDS 的結合緩沖液 TE 緩沖液 SEVAG 漂白劑（Bleach) 含 MgCl2 的 PBS(pH7.2) 果蠅勻漿緩沖液實驗步驟 一 材料與設備1)0.lmol/LNaOH2)70%(V/
2.3.1－從果蠅胚胎中提取總－RNA－或－poIy(A)－+RNA
試劑、試劑盒0.lmol LNaOH乙醇3mol L 乙酸鈉苯酚無 SDS 的結合緩沖液含 SDS 的結合緩沖液TE 緩沖液SEVAG漂白劑（Bleach)含 MgCl2 的 PBS(pH7.2)果蠅勻漿緩沖液實驗步驟一 材料與設備1)0.lmol/LNaOH2)70%(V/V) 乙醇3)3mol/
純化RNA實驗——從培養的細胞中純化總RNA
實驗材料細胞試劑、試劑盒RNA 提取緩沖液變性液水飽和酚儀器、耗材培養皿Falcon 2063 管實驗步驟1. 取 1 個細胞已長滿的 100 ml 培養皿，吸出培養液，加 2 ml RNA 提取緩沖液，用橡膠刮棒刮下細胞。RNA 提取緩沖液：變性液，20 mlβ-巰基乙醇，0.144 ml2 mo
從包含體中溶解大腸桿菌重組蛋白實驗
實驗方法原理分子克隆技術能夠使細菌高水平表達蛋白，因此原核表達是一個非常便利的獲得重組蛋白的系統。遺憾的是這些蛋白在細菌中易于聚合和沉淀，形成難溶解的包含體，因而很難純化。非細菌蛋白的包含體尤其普遍。雖然沒有一種可用于所有蛋白的普適方法，還是有許多策略適用于包含體蛋白的溶解。本方案描述的就是這些策略
從包含體中溶解大腸桿菌重組蛋白實驗
實驗方法原理 分子克隆技術能夠使細菌高水平表達蛋白，因此原核表達是一個非常便利的獲得重組蛋白的系統。遺憾的是這些蛋白在細菌中易于聚合和沉淀，形成難溶解的包含體，因而很難純化。非細菌蛋白的包含體尤其普遍。雖然沒有一種可用于所有蛋白的普適方法，還是有許多策略適用于包含體蛋白的溶解。本方案描述的就是這些策
從包含體中溶解大腸桿菌重組蛋白實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 分子克隆技術能夠使細菌高水平表達蛋白，因此原核表達是一個非常便利的獲得重組蛋白的系統。遺憾的是這些蛋白在細菌中易于聚合和沉淀，形成難溶
利用－ConcertPlant－試劑從植物組織中純化－RNA－實驗
以下概述的是 ConcertPlant 試劑（Invitrogen) 所附帶的方案。該方案不是以酚為基礎的，但需要加氯仿。該試劑用于多種植物的組織中分離 RNA, 包括藍葉云杉針、馬鈴薯塊莖、玉米種子和棉花葉。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。 實驗材料
利用－ConcertPlant－試劑從植物組織中純化－RNA－實驗
實驗材料 植物組織 試劑、試劑盒 Concert Plant RNA試劑NaCl氯仿異丙醇乙醇DEPC處理過的水 實驗步驟 一、材料 1.緩沖液、溶液和試劑 ConcertPlantRNA試劑(Invitrogen)，4°C預冷 NaCl,5mol/L(無RNA酶）
從瓊脂糖凝膠中純化－PCR－片段實驗
試劑、試劑盒 乙醇溴化乙錠電泳緩沖液PCR 片段瓊脂糖凝膠細胞和組織儀器、耗材 微量離心管解剖刀紫外燈真空裝置實驗步驟 一、材料1. 緩沖液、溶液和試劑（1）乙酵（95%)（2）嵌入染料，如溴化乙錠（3）TAE 電泳緩沖液? ? ? ? ?40 mmol/L 三羥甲基氨基甲烷-醋酸鹽,pH8.2?
從瓊脂糖凝膠中純化－PCR－片段實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 乙醇 溴化乙錠 電泳緩沖液 PCR 片段 瓊脂糖凝膠 細胞和組織
從瓊脂糖凝膠中純化－PCR－片段實驗
Wizard SV 膠和 PCR 純化系統是利用硅基法從瓊脂糖凝膠中或從 PCR 擴增反應混合物中直接純化 PCR 片段的方法。本實驗來源于 PCR 實驗指南（第二版），作者：種康，瞿禮嘉。試劑、試劑盒乙醇溴化乙錠電泳緩沖液PCR 片段瓊脂糖凝膠細胞和組織儀器、耗材微量離心管解剖刀紫外燈真空裝置實驗
重組的果蠅－ACF－的表達和純化實驗
實驗材料高滴度的 Acf1－FLAG 和 ISWI 桿狀病毒儲液晚對數期的懸浮培養的 Sf9 細胞試劑、試劑盒公磷酸緩沖鹽溶液（PBS）裂解緩沖液 FFLAG-M2 樹脂 1：1（V V）懸浮液（Sigma－Aldrich）稀釋緩沖液 F洗滌緩沖液 F洗脫緩沖液 F液氮牛血清白蛋白 （BSA） 標準
重組的果蠅－ACF－的表達和純化實驗
實驗方法原理 實驗材料 高滴度的 Acf1－FLAG 和 ISWI 桿狀病毒儲液晚對數期的懸浮培養的 Sf9 細胞試劑、試劑盒 公磷酸緩沖鹽溶液（PBS）裂解緩沖液 FFLAG-M2 樹脂 1：1（V V）懸浮液（Sigma－Aldrich）稀釋緩沖液 F洗滌緩沖液 F洗脫緩沖液 F液氮牛血清白蛋白
從包涵體中純化表達蛋白
實驗材料 表達靶蛋白的大腸桿菌細胞試劑、試劑盒 細胞裂解緩沖液 I細胞裂解緩沖液Ⅱ脫氧膽酸濃鹽酸包涵體溶解緩沖液 I包涵體溶解緩沖液ⅡKOHPMSFSDS 凝膠加樣緩沖液含尿素的 Tris-ClDNaseI溶菌酶SDS-聚丙烯酰胺凝膠儀器、耗材 Sorvall GSA 轉頭或相當的轉頭pH 試紙磨光
從包涵體中純化表達蛋白
實驗方法原理蛋白質在大腸桿菌中的高水平表達，常常導致形成相差顯微鏡下可見的細胞質顆粒或包涵體。這些由表達蛋白聚集成的包涵體很容易與可溶性蛋白和膜結合蛋白分離。高水平表達外源蛋白的細菌經離心濃縮后，可通過機械法、超聲處理法或溶菌酶加去污劑的方法進行裂解。包涵體經離心沉淀后，可用Triton X-100
從包涵體中純化表達蛋白
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蛋白質在大腸桿菌中的高水平表達，常常導致形成相差顯微鏡下可見的細胞質顆粒或包涵體。這些由表達蛋白聚集成的包涵體很容易與可溶性蛋白和膜結合蛋白分離。高水平表達外源蛋白的細菌經離心濃縮后，可通過機械法、超聲處理法或溶菌酶加去污劑的方
果蠅胚胎電生理學記錄
1.首先要選擇測溫范圍合適的溫度計，防止被測物體溫度過高時，液柱將溫度計脹裂。若無法估計被測物體的溫度，則應先用測溫范圍較大的溫度計，然后再挑選合適的溫度計，并使其最小分度能符合實驗精確度的要求。為減小溫度計對實驗系統的影響，要求實驗系統應有足夠大的熱容量，這樣才能得出較準確的實驗結果。2.在測溫時
重組的果蠅－NAP－1－的表達和純化實驗
實驗方法原理 實驗材料 晚對數期的懸浮培養的SFP細胞試劑、試劑盒 高滴度的 His－NAP－1 桿狀病毒儲液（Orbigen）磷酸緩沖鹽溶液（PBS）裂解緩沖液 H洗滌緩沖液 H洗脫緩沖液 HHEGD 緩沖液NAP－1 純化緩沖液 Ni－NTA牛血清白蛋白（BSA）標準 乙醇液氮儀器、耗材 離心機
高冠軍/戴俊彪合作果蠅組蛋白H3/H4系統解析組蛋白劑量
組蛋白（Histone）在真核生物染色體中扮演著重要的角色，是染色體結構單元核小體的重要組成部分。由核心組蛋白H3，H4，H2A，H2B形成的八聚體是DNA纏繞的主要承載體【1】。除了用以裝配染色體外，組蛋白的另外一個重要功能是參與基因組信息的表達調控。組蛋白氨基酸殘基上的翻譯后修飾如乙酰化、甲
重組的果蠅－NAP－1－的表達和純化實驗2
實驗材料見基本方案試劑、試劑盒見基本方案咪唑的 Superflow 層析緩沖液儀器、耗材見基本方案NTA Superflow 樹脂（Qiagen）FPLC 柱實驗步驟1. 實驗前準備主要材料見基本方案附加材料含有 20 mmol/L 和 500 mool/L 咪唑的 Superflow 層析緩沖液N
重組的果蠅－NAP－1－的表達和純化實驗1
實驗材料晚對數期的懸浮培養的SFP細胞試劑、試劑盒高滴度的 His－NAP－1 桿狀病毒儲液（Orbigen）磷酸緩沖鹽溶液（PBS）裂解緩沖液 H洗滌緩沖液 H洗脫緩沖液 HHEGD 緩沖液NAP－1 純化緩沖液 Ni－NTA牛血清白蛋白（BSA）標準乙醇液氮儀器、耗材離心機Wheaton 杜恩斯
利用－ConcertPlant－試劑從植物組織中純化－RNA
? ? ? ? ? ? 實驗材料 植物組織 試劑、試劑盒 Concert Plant RNA試劑 NaCl 氯仿
果蠅實驗技術
一、實驗原理?果蠅（fruit fly）是雙翅目（Diptera）昆蟲，屬果蠅屬（genus Drosophila），約有2500個種。通常用作遺傳學實驗材料的是黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）。果蠅優點：?1. 飼養容易。在常溫下，以玉米粉等作飼料就可以生長，繁殖。?2.
重組蛋白純化的基本策略
及的具體步驟最終取決于樣品的性質。但也有共同可參考的階段??捕獲階段：目標是澄清、濃縮和穩定目標蛋白。??中度純化階段：目標是除去大多數大量雜質，如其它蛋白、核酸、內毒素和病毒等。??精制階段：除去殘余的痕量雜質和必須去除的雜質。?分離方法的選擇??? 根據蛋白質的特殊性質采用不同的分離方法：蛋白質