基本方案2重組腺病毒通過耳外靜脈注射到兔的肝臟
實驗材料成年兔試劑、試劑盒乙醇重組腺病毒懸液凡士林儀器、耗材注射器實驗步驟1.將成年實驗兔放置于固定盒內。用浸取了溫水的紗布反復擦拭使其耳內血管膨脹。也可使用 70% 的乙醇。注意其靜脈血管位于耳朵外緣,動脈游走于中心。2.在 5 ml 注射器上裝上 21 G 蝶形針頭,然后吸入 3 ml 腺病毒懸液,排除注射器內的空氣。注射器內含有一定量的空氣可使所有的溶液被注射入內。3.扎入蝶形針頭至兔耳靜脈,并沿血管行進足夠的深度以方便固定針頭。開始以 lml/min 的速率注射腺病毒。在蝶形針頭內留滯少量的溶液,注意一定不能注射人任何空氣。4.移出針頭,然后迅速用紗布墊子壓住扎口止血。5.用涼水輕柔的清洗兔耳。并在兔耳上涂抹少量凡士林。觀察兔子 10~15 min,如果兔看起來要昏睡,撫摸它保持其清醒。并立起或移動固定盒。支持方案 收獲肝組織以分析轉基因表達如果轉基因編碼的蛋白分泌至循環系統,那么其表達可經抽取動物血液并通過對血漿中的蛋......閱讀全文
基本方案2-RNA-抽提和標記
試劑、試劑盒TRIzol 試劑PBS氣仿乙醇乙酸鈉引物Superscript Ⅱ RNase H反轉錄酶10 X low-T dNTP 混合物EDTATE 緩沖液儀器、耗材RNeasy Maxi 試劑盒組織勻漿機圓底離心管圓錐底離心管水平離心機薄壁 PCR 管熱循環儀熒光掃描儀實驗步驟展
基本方案2-基因組-DNA-的擴增
實驗材料基因組DNA試劑、試劑盒4dNTP 混合物10 X PCR 擴增緩沖液寡聚核苷酸引物Taq DNA 聚合酶礦物油篩(子)瓊脂糖DNA 分子大小標準參照物儀器、耗材聚丙稀微量離心管循環變溫加熱器實驗步驟
基本方案2-轉染原代氣管上皮細胞
試劑、試劑盒聚凝胺HamF-12培養基儀器、耗材原代氣管上皮細胞培養皿針筒過濾器MWCO 分析膜實驗步驟展
酵母實驗操作方案(2)
附錄一 培養基 LB: Tryptone 10g 1% Yeast Extract 5g 0.5% NaCl 5g 0.5% 【Agar】 15g 1.5%(固體培養基另加) dH2O稀釋至1L,高壓滅菌 YPD: Yeast Extract 10g 1%
基本方案2-使用反轉錄-PCR-檢測染色體易位
實驗材料骨髓和血樣中提取的 RNA 沉淀試劑、試劑盒DEPC 水5 X 反轉錄緩沖液4dNTP 混合液DTTRNA 酶抑制劑反轉錄酶第一輪 PCR 引物組10 X PCR 擴增緩沖液MgCl2Taq DNA 聚合酶礦物油第二輪 PCR 引物組儀器、耗材水浴器材熱循環儀適用PCR管實驗步驟展
基本方案2-反轉錄酶病毒感染初級成肌細胞
實驗材料培養基中的主要成肌細胞試劑、試劑盒篩選逆轉錄病毒上清溴化己二甲銨儀器、耗材6孔板或60mm 有膠原涂層的組織培養板配備了微量培養板的臺式離心機實驗步驟
基本方案2-直接-Southern-雜交檢測異常擴增和甲基化實驗
實驗材料基因組DNA試劑、試劑盒5 X 限制性緩沖液10 X Ficoll載樣緩沖液1 X TAE 緩沖液變性緩沖液轉性緩沖液中性緩沖液雜交緩沖液儀器、耗材Whatman 3MM 濾紙Nytran SuPercharge Turboblotter Rapid Downward Transfer 系統
基本方案2-植入基因修正的細胞到新生的小鼠腦內
實驗材料基因修正的細胞新生小鼠試劑、試劑盒乙醇抗菌素外科膠水儀器、耗材漢密爾頓注射器顯微操作儀手術用具幼鼠腦圖譜加熱板實驗步驟1.為移植開始培養基因修正的細胞,收獲 80%~90% 的匯合度的細胞。手術時,當麻醉和準備動物的時候準備好懸浮細胞(支持方案)。手術期間,每 30~60 min 重懸細胞。
基本方案2-G-顯帶后的染色體原位雜交實驗
實驗材料未封片或 Entdlan 封片 G 顯帶的中期細胞試劑、試劑盒二甲苯濃度梯度乙醇丙酮 甲醇固定劑2 X SSC儀器、耗材全染色體涂染探針Coplin 缸實驗步驟
基本方案2-顯微鏡檢查法、成像、用于-CGH-的圖像分析
實驗步驟直接的視覺觀察被用于 CGH 雜交的初期評價并且能提供染色體改變的初步解釋,應用裝配有相應激發光源、濾片、63X 或 100X 油鏡鏡頭的熒光顯微鏡觀察 CGH 雜交的中期分裂相。DNA 序列拷貝數的改變決定于每一條染色體上相應紅/綠熒光強度的改變。兩種相關突光強度的差別能通過雙通道濾片與復
基本方案2-重組腺病毒通過耳外靜脈注射到兔的肝臟
實驗材料成年兔試劑、試劑盒乙醇重組腺病毒懸液凡士林儀器、耗材注射器實驗步驟1.將成年實驗兔放置于固定盒內。用浸取了溫水的紗布反復擦拭使其耳內血管膨脹。也可使用 70% 的乙醇。注意其靜脈血管位于耳朵外緣,動脈游走于中心。2.在 5 ml 注射器上裝上 21 G 蝶形針頭,然后吸入 3 ml 腺病毒懸
基本方案2-PCR-產物限制性分析線粒體-DNA-點突變的篩查
實驗材料粒細胞或骨骼肌基因組 DNA試劑、試劑盒10XPCR擴增緩沖液Taq DNA 聚合酶4dNTP 混合液正反寡核苷酸引物石蠟油瓊脂糖膠10 X 限制性緩沖液BSA亞精胺限制性內切核酸酶6X 水溶性聚蔗糖凝膠加樣緩沖液DNA 分子質量標記1 X TBE 緩沖液溴化二氨乙啡啶液儀器、耗材UV St
膜蛋白研究的整體解決方案2
NeXtal? CubicPhase Kit之所以能夠提高膜蛋白結晶的成功率,主要原因:1.采用NeXtal CubicPhase μplate,這種結晶板修飾了monoolein (MO,用于建立脂立方相),另外這種結晶板具有非常好的光學特性,在可見光下就可以觀測到膜蛋白晶體。2.采用專門的膜蛋白
蛋白質組實驗全套流程方案2
聚丙烯酰胺凝膠的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳分離膠所用溶液溶液成分不同體積(ml)凝膠液中各成分所需體積(ml)5101520253040506%?? 水2.65.37.910.613.215.921.226.5?? 30%丙烯酰胺溶液123456810?? 1.
動物實驗基本技術2
第五節 實驗動物的采血法實驗研究中,經常要采集實驗動物的血液進行常規質量檢測、細胞學實驗或進行生物化學分析,故必須掌握正確的采集血液的技術。采血方法的選擇,主要決定于實驗的目的和所需血量以及動物種類。一、大鼠、小鼠的采血方法(一)剪尾采血:需血量很少時常用本法,如作紅、白細胞計數、血紅蛋白測定、制作
動物實驗基本技術2
第三節 實驗動物的麻醉方法 麻醉(anesthesia)的基本任務是消除實驗過程中所至的疼痛和不適感覺,保障實驗動物的安全,使動物在實驗中服從操作,確保實驗順利進行。 一、常用的麻醉藥 (一)常用局部麻醉劑:普魯卡因,此藥毒性小,見效快,常用于局部浸潤麻醉,用時配成0.5%
動物實驗基本技術2
第五節 實驗動物的采血法實驗研究中,經常要采集實驗動物的血液進行常規質量檢測、細胞學實驗或進行生物化學分析,故必須掌握正確的采集血液的技術。采血方法的選擇,主要決定于實驗的目的和所需血量以及動物種類。一、大鼠、小鼠的采血方法(一)剪尾采血:需血量很少時常用本法,如作紅、白細胞計數、血紅蛋白測定、制作
動物實驗基本技術2
第三節 實驗動物的麻醉方法麻醉(anesthesia)的基本任務是消除實驗過程中所至的疼痛和不適感覺,保障實驗動物的安全,使動物在實驗中服從操作,確保實驗順利進行。一、常用的麻醉藥(一)常用局部麻醉劑:普魯卡因,此藥毒性小,見效快,常用于局部浸潤麻醉,用時配成0.5%~1%;利多卡因,此藥見效快,組
肽質量檢索實驗_基本方案
實驗材料蛋白樣品儀器、耗材質譜儀實驗步驟鑒定數據庫中已有序列的蛋白質的算法基于以下一些理念:(1) 肽段是由切點專一的試劑水解蛋白質產生的,通常用已知切點專一的蛋白酶。(2) 這些肽段的質量由 MALDI-MS 或 ESI-MS 精確測定。(3) 計符蛋白序列數據庫中的每一序列被實驗中所用水解試劑水
詳述熔點儀基本故障維修方案
熔點儀基本故障維修方法:1.插入毛細管后電流表不歸零該設備插入毛細管后電流表應為零,因為毛細管中的藥品擋住了光路。藥品熔解后,光透過玻璃毛細管到達光電池,光電池感光輸出電流實現終熔顯示。同時光電池輸出電流使電流表從零打到滿度。如一開始插入毛細管時儀器的電流表就不歸零,則該設備無法使用。現將可能造成插
免疫沉淀實驗——基本方案
經典的免疫沉淀是可溶性抗原與其抗體產生可見沉淀反應的血清學試驗。后來發展為抗原抗體結合后,用固相化的蛋白A或蛋白G小珠等來吸附分離抗原抗體復合體,達到檢測微量抗原或抗體的目的。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒裂解緩沖液稀釋緩沖液SDSTrisTSA儀器、耗材轉子離心機實驗步驟1. ?表面標記或生物合成標記
定點誘變實驗——基本方案
定點突變是指通過聚合酶鏈式反應(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因組,也可以是質粒)中引入所需變化(通常是表征有利方向的變化),包括堿基的添加、刪除、點突變等。定點突變能迅速、高效的提高DNA所表達的目的蛋白的性狀及表征,是基因研究工作中一種非常有用的手段。實驗材料DNA試劑、試劑盒TE寡核
MALDlMS實驗_基本方案
實驗方法原理線性 MALDI-MS:MALDI-MS質譜儀恐怕是概念上和設計上都最簡單的質譜儀,分子(分析物)經 MALDI 方式離子化,離子的質荷比 (m/z)由飛行時間質分析器檢測(見圖 5,1) 。 測量的質量精確度與m/z有關, 25ku 以下可達到約 0.01%-0.05% 的精確度,到
強生2針疫苗方案在歐盟進入加速評估!
強生旗下楊森制藥公司近日宣布,已向歐洲藥品管理局(EMA)提交了2份營銷授權申請(MAA),申請批準研究性埃博拉疫苗方案用于預防由扎伊爾埃博拉病毒株引起的埃博拉病毒病(EVD)。2份MAA已被平行提交,支持2針免疫方案中的每種疫苗(Ad26.ZEBOV,MVA-BN-Filo)。今年9月,EMA
方案2-反相微型層析柱的制備實驗
實驗材料用于質譜分析的蛋白質或多肽樣品試劑、試劑盒乙腈(HPLC級)甲醇基質溶液三氟乙酸儀器、耗材平頭鑷子GELoader 移液吸頭MALDI-MS板移液吸頭Poros R1、Poros R2 或 Oligo R3 層析樹脂注射器實驗步驟1.將 GELoader 移液吸頭的尖端壓扁。圖 8.32 所
基本方案3-雜交和數據提取
實驗材料玻璃芯片試劑、試劑盒酵母 tRNA20 X SSC50 X Denhardt 溶液10% SDS0.06X SSC 洗脫緩沖液儀器、耗材薄壁 PCR 管熱循環儀芯片雜交板水浴鍋臨床離心機芯片掃描儀圖像分析軟件實驗步驟展
熒光原位雜交實驗——基本方案
實驗材料樣品試劑、試劑盒DNA探針非同位素甲酰胺雜交混合液甲酰胺Triton X-100SSC儀器、耗材相差顯微鏡蓋玻片水浴鍋加濕盒濾光片熒光顯微鏡實驗步驟1a. ?石蠟切片或細胞的雜交:按石蠟切片或細胞的原位雜交實驗的基本方案步驟1~7,對載玻片進行脫蠟、水化、 封閉和脫水處理。將標本晾干(或在干
基本方案1-cDNA-合成與印跡
實驗材料母板試劑、試劑盒細菌細胞中的標記LB 培養基氨芐青霉素乙醇Super 肉湯培養基甘油96孔堿裂液T low E 緩沖液10 X PCR 緩沖液20 X SSC琥拍酸酐儀器、耗材96深孔板和V 形塑料細胞培養皿水平微量培養板離心96孔多位點復制針1 加侖儲存袋多微孔的帶層帶孔的振蕩器用于深孔板
離子交換層析實驗——基本方案
離子交換層析(Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC)是以離子交換劑為固定相,依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。實驗材料蛋白質試劑、試劑盒離子交換緩沖液儀器、耗材離子交換層析柱梯度混合器電導表實驗步驟1.
YAC克隆的分析實驗——基本方案
YAC帶有天然染色體所有的功能元件,包括一個著絲粒,一個DNA復制起點,兩個端粒。YAC能夠容納長達幾百kb的外源DNA,這是質粒和黏粒辦不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因,在染色體步移中每次允許更大的步移距離,同時能夠減少完整基因組文庫所需的克隆數目。實驗材料酵母菌試劑、試劑盒AHCYPD