實驗概要monESCs傳代、凍存及復蘇主要試劑DMEM/F12培養液、monESCs培養液、凍存液C、1 mg/mL膠原酶Ⅳ主要設備15 mL離心管,5 mL、10 mL移液管,凍存管、6孔培養板、倒置顯微鏡實驗步驟傳代前一天首先準備好MEF飼養層細胞,飼養層細胞要求密度為1.2×104~1.5×104 cells/cm2,切忌密度過高①傳代之前首先在37℃水浴鍋中預熱Ⅳ型膠原酶、DMEM/F12培養液和monESCs培養液。②傳代時首先吸棄舊的培養液上清,然后用DMEM/F12培養液輕輕沖洗一遍,之后加入1mg/mL的Ⅳ型膠原酶,放在培養箱中消化10min左右,消化過程中在顯微鏡下注意觀察消化的效果,當克隆邊緣卷起時可以終止消化,直接棄掉酶,加入新鮮的DMEM/F12培養液洗一遍。!注意:monESCs的消化時間和其狀態以及膠原酶Ⅳ的儲存時間相關,新鮮配制的酶一般作用較快。③再次加入DMEM/F12培養液1 mL/孔,用2 m......閱讀全文
實驗概要猴胚胎干細胞(monkey Embryonic Stem Cells,monESCs)的分離及建系主要試劑重組人卵泡刺激素(recombinant human Follicle Stimulating Hormone,rhFSH)、hCG、豚鼠補體、抗猴全血清、TL-HEPES、0.5