體外轉錄合成單鏈RNA探針:體外轉錄法
體外轉錄法l 體外轉錄合成單鏈RNA探針1. 用適當的限制酶消化超螺旋質粒DNA制備5 pmol的線性模板DNA。取一小份消化的DNA（100ng）進行瓊脂糖凝膠電泳分析。如有必要，再補加限制性酶進行溫育，直至不再殘存痕量的未消化DNA。2. 如必須用產生3’突出端的限制酶如Pst I 或 Sst I，則應用噬菌體T4 DNA聚合酶在四種dNTP的存在下處理消化的DNA片段，以除去產生的3’突出端。3. 用酚：氯仿抽提及用標準乙醇沉淀純化模板DNA。將DNA溶解于水，使其終濃度為100 nm......閱讀全文
RNA－大量轉錄合成
實驗材料 模板 DNA 或質粒試劑、試劑盒 TE TE 飽和酚 氯仿異內醇 3mol LNaAc 無水乙醇 5X 轉錄緩沖液 lOOmmoL LDTT RNasin rATPrGTPrUTPrCTP SF6T3 或 T7RNA 聚合酶 異戊醇 DNase 7.5mol L 乙酸銨 無水乙醇 乙醇實驗
RNA－大量轉錄合成
? ? ? ? ? ? 實驗材料 模板 DNA 或質粒 試劑、試劑盒 TE ? TE 飽和酚 ? 氯仿
RNA－標準轉錄反應
? ? ? ? ? ? 實驗材料 模板 DNA 或質粒 試劑、試劑盒 TE 異丙醇 3mol LNaAc
3.5－RNA－反轉錄
利用 RNA 模板通過反轉錄獲得 DNA,進而復制和感染細胞實驗材料poly(A)+RNA反轉錄酶鼠源反轉酶 或禽源反轉錄酶試劑、試劑盒oligo(dT)12-18lmol LTris-Cl1mol LTris-Cllmol LKC125 mmol LMgCl2dNTP 混合物0.lmol LDTT
RNA－標準轉錄反應
實驗材料 模板 DNA 或質粒試劑、試劑盒 TE 異丙醇 3mol LNaAc 無水乙醇 5×轉錄緩沖液 l00 mmol L DTT RNasin rATPrGTPrUTP 各 2.5 mmol L [α42P] rCTP SPGT3 或 T7RNA 聚合酶 TE-飽和的酚氯仿異戊醇 DN
RNA的轉錄與逆轉錄相關介紹
轉錄是以DNA為模板合成RNA的過程，經過轉錄DNA分子中的貯存信息傳遞到RNA分子中，再由mRNA做為模板合成蛋白質分子。逆轉錄也是從RNA的一個特定位置開始的，以RNA分子中的一條鏈為模板，在逆轉錄酶的作用下，以四種脫氧核苷酸為原料，合成方向仍是5'→3'，完成cDNA的合成。大
3.1.2－RNA－大量轉錄合成
RNA 標準轉錄體系的一般回收率為 lugRNA/ug 質粒 DNA, 使用下面的方法，可以提高回收率至 5?l0ug RNA/ug 質粒 DNA。大量制備 RNA 可以用于體外翻譯。實驗材料模板 DNA 或質粒試劑、試劑盒TETE 飽和酚氯仿異內醇3mol LNaAc無水乙醇5X 轉錄緩沖液lOO
信使RNA轉錄的調控
一、遺傳信息的表達有時序調控和適應調控，轉錄水平的調控是關鍵環節，因為這是表達的第一步。轉錄調控主要發生在起始和終止階段。 二、操縱子是細菌基因表達和調控的單位，有正調節和負調節因子。阻遏蛋白的作用屬于負調控。環腺苷酸通過其受體蛋白（CRP）促進轉錄，可促進許多誘導酶的合成。操縱子可構成綜合性
3.1.1－RNA－標準轉錄反應
利用 DNA 聚合酶 I 的大片段（Klenow 酶）的 3＇— 5＇外切酶活性將 3＇黏性末端轉化成平末端。具體方法是在體外轉錄體系尚未加入核苷酸和 RNA 聚合酶時，加入 Klenoow 片段 (終濃度為 5U/ug)，于 22℃ 孵育 15mim, 然后再加入核苷酸混合物和RNA 聚合酶實驗材
RNA轉錄的技術特點
轉錄時，細胞通過堿基互補的原則來生成一條帶有互補堿基的mRNA，通過它攜帶密碼子到核糖體中可以實現蛋白質的合成。與DNA的復制相比，轉錄有很多相同或相似之處，亦有其自己的特點。轉錄中，一個基因會被讀取并復制為mRNA。就是說，以特定的DNA片段作為模板，以DNA依賴的RNA聚合酶作為催化劑，合成前體
RNA探針的相關內容
RNA探針是一類很有前途的核酸探針,由于RNA是單鏈分子,所以它與靶序列的雜交反應效率極高。早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針,這些RNA是在細胞基因轉錄或病毒復制過程中得到標記的,標記效率往往不高,且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的,而不是用于檢測。例如,
RNA探針的基本介紹和重要意義
RNA探針是一類很有前途的核酸探針，由于RNA是單鏈分子，所以它與靶序列的雜交反應效率極高。早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針，這些RNA是在細胞基因轉錄或病毒復制過程中得到標記的，標記效率往往不高，且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的，而不是用于檢測。例如，
分子雜交RNA探針的技術特點及應用介紹
RNA探針是一類很有前途的核酸探針，由于RNA是單鏈分子，所以它與靶序列的雜交反應效率極高。早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針，這些RNA是在細胞基因轉錄或病毒復制過程中得到標記的，標記效率往往不高，且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的，而不是用于檢測。例如，在篩
關于RNA探針的基本原理介紹
體外轉錄技術不斷完善，已相繼建立了單向和雙向體外轉錄系統。該系統主要基于一類新型載體pSP和pGEM，這類載體在多克隆位點兩側分別帶有SP6啟動子和T7啟動子，在SP6RNA聚合酶或T7RNA聚合酶作用下可以進行RNA轉錄，如果在多克隆位點接頭中插入了外源DNA片段，則可以此DNA兩條鏈中的一條
信使RNA的反轉錄酶與反轉錄過程
定義：以反義RNA為模版，通過反轉錄酶，進行的RNA轉錄 1．概念反轉錄是以RNA為模板合成DNA的過程，也稱逆轉錄。這是DNA生物合成的一種特殊方式。 2．反轉錄酶與反轉錄過程 反轉錄過程由反轉錄酶催化，該酶也稱依賴RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA為模板催化DNA鏈的合成。合
RNA復制的轉錄與逆轉錄的過程介紹
轉錄是以DNA為模板合成RNA的過程,經過轉錄DNA分子中的貯存信息傳遞到RNA分子中,再由mRNA做為模板合成蛋白質分子。逆轉錄也是從RNA的一個特定位置開始的,以RNA分子中的一條鏈為模板,在逆轉錄酶的作用下,以四種脫氧核苷酸為原料,合成方向仍是5'→3',完成cDNA的合成
真核生物RNA的轉錄與原核生物RNA的轉錄的區別
真核生物RNA的轉錄與原核生物RNA的轉錄過程在總體上基本相同，但是，其過程要復雜得多，主要有以下幾點不同： 1、真核生物RNA的轉錄有的是在細胞核內進行的，而蛋白質的合成則是在細胞質內進行的。且真核生物線粒體和葉綠體的遺傳信息系統被稱為真核細胞的第二遺傳信息系統，或核外基因及其表達體系。這是
實驗室HIV檢測技術概述及進展（三）
?????? 2.2.1? 多聚酶鏈反應檢測法?????? PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性—退火—延伸三個基本反應步驟構成。??? ?????? ① 模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93 ℃左右一定時間后，使模板DNA雙
RNA逆轉錄(RT)過程
一，準備工作? ? 1， 實驗器具與材料: (1)移液槍:200ul、10ul (2)吸頭:200ul、20ul (3)EP 管 1.5ml、100ul (4)水浴箱 2，實驗器具的處理與準備? ? 逆轉錄(RT)? ? 塑料制品:(包括吸頭、EP 管等)? ? 將塑料制品逐個浸泡于 1‰DEPC
真核生物RNA的轉錄與原核生物RNA的轉錄過程差異
⒈ 真核生物RNA的轉錄有的是在細胞核內進行的，而蛋白質的合成則是在細胞質內進行的。且真核生物線粒體和葉綠體的遺傳信息系統被稱為真核細胞的第二遺傳信息系統，或核外基因及其表達體系。這是因為研究發現，線粒體和葉綠體中除有DNA外，還有RNA（mRNA、tRNA、 RNA）、核糖體、氨基酸活化酶等。說明
新生鏈轉錄分析的方法特點
中文名稱新生鏈轉錄分析英文名稱nascent chain transcription analysis定 義用于對基因轉錄調控研究的一種方法。即分離細胞核的過程中，所有基因轉錄都暫時終止，當把細胞核轉入核苷三磷酸和輔助因子齊全的緩沖體系中時，它就會恢復轉錄功能。緩沖體系中加入標記核苷三磷酸，在轉錄
RNA探針合成方法和合成效率檢測方法介紹
相關專題制備RNA探針在RNA的雜交檢測實驗中，應用標記的RNA 探針將獲得高靈敏度的雜交檢測結果，與DNA?探針相比，檢測靈敏度提高10-100倍。因為對于不同的雜交體類型來說，RNA-RNA雜交體的結合強度高于RNA-DNA和DNA-DNA雜交體。對于通過Northern blots檢測低濃度m
真核生物RNA的轉錄與原核生物RNA的轉錄過程的區別
⒈ 真核生物RNA的轉錄有的是在細胞核內進行的,而蛋白質的合成則是在細胞質內進行的。且真核生物線粒體和葉綠體的遺傳信息系統被稱為真核細胞的第二遺傳信息系統,或核外基因及其表達體系。這是因為研究發現,線粒體和葉綠體中除有DNA外,還有RNA(mRNA、tRNA、 RNA)、核糖體、氨基酸活化酶等。說明
RNA探針的合成方法和合成效率檢測
在RNA的雜交檢測實驗中，應用標記的RNA 探針將獲得高靈敏度的雜交檢測結果，與DNA 探針相比，檢測靈敏度提高10-100倍。因為對于不同的雜交體類型來說，RNA-RNA雜交體的結合強度高于RNA-DNA和DNA-DNA雜交體。對于通過Northern blots檢測低濃度mRNA，以及原
體外膜肺氧合ECMO的應急預案
（一）ECMO治療時突發事件如下一、ECMO運行開始時：1. 準備物品不到位；2. 置管不順利；3. 預充不熟練；4. 無菌操作不到位；二、ECMO運行過程中：1. 管路問題：深度變動、打折、脫出、破損；2. 流量探測器報警：耦合劑干燥、破損；3. 氧合器問題：血栓形成、破損、滲血；4.
體外膜肺氧合ECMO的應急預案
體外膜肺氧合（ECMO）突發事件與應急預案： （一）ECMO治療時突發事件如下一、ECMO運行開始時：1. 準備物品不到位；2. 置管不順利；3. 預充不熟練；4. 無菌操作不到位；二、ECMO運行過程中：1. 管路問題：深度變動、打折、脫出、破損；2. 流量探測器報警：耦合劑干燥、破損；3
體外膜肺氧合ECMO的應急預案
（一）ECMO治療時突發事件如下一、ECMO運行開始時：1. 準備物品不到位；2. 置管不順利；3. 預充不熟練；4. 無菌操作不到位；二、ECMO運行過程中：1. 管路問題：深度變動、打折、脫出、破損；2. 流量探測器報警：耦合劑干燥、破損；3. 氧合器問題：血栓形成、破損、滲血；4. 主
分子雜交的分類
分子雜交基因探針根據標記方法不同可粗分為放射性探針和非放射性探針兩大類，根據探針的核酸性質不同又可分為DNA探針，RNA探針，cDNA探針，cRNA探針及寡核苷酸探針等幾類，DNA探針還有單鏈和雙鏈之分。下面分別介紹這幾種探針。DNA探針DNA探針是最常用的核酸探針，指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DN
RNA干擾（轉錄后基因沉默）實驗
RNA干擾（RNA interference, RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。目前主要用于（1）特異性剔除或關閉特定基因的表達 （2）探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療 （3）使
轉錄組的重編寫：RNA編輯
前 言 基因的功能探索是生命科學研究的永恒主題。近幾年以CRISPR-Cas9技術的發展讓直接在高等生物體內進行基因的功能研究成為可能。但除了DNA之外， DNA的轉錄產物--RNA在生命活動中也發揮著極其重要的作用，且與癌癥等多種疾病的發生密切相關。因此，對RNA進行功能研究和錯誤RNA