感受態細胞的制備和轉化
第一節 概 述 在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌,需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態以攝取外源DNA。轉化(Transformation)是將外源DNA分子引入受體細胞,使之獲得新的遺傳性狀的一種手段,它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術。 轉化過程所用的受體細胞一般是限制修飾系統缺陷的變異株,即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變體(Rˉ,Mˉ),它可以容忍外源DNA分子進入體內并穩定地遺傳給后代。受體細胞經過一些特殊方法(如電擊法,CaCl2 ,RbCl(KCl)等化學試劑法)的處理后,細胞膜的通透性發生了暫時性的改變,成為能允許外源DNA分子進入的感受態細胞(Compenent cells)。進入受體細胞的DNA分子通過......閱讀全文
感受態細胞的制備和轉化
第一節 概 述?在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌,需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態以攝取外源DNA。轉化(Transformati
農桿菌感受態細胞的制備和轉化
實驗概要本實驗介紹了根癌農桿菌GV3101感受態細胞的制備及凍融法轉化。主要試劑利福平，LB培養基，NaCl，CaCl2，YEP培養基，卡那霉素主要設備搖床，高速離心機，低溫冰箱，水浴鍋實驗材料根癌農桿菌GV3101單菌落實驗步驟1. 根癌農桿菌GV3101感受態細胞的制備?? 1) 挑取單菌落GV
大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化
摘要： 下文介紹大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化. 1、感受態細胞的概念重組 DNA 分子體外構建完成后,必須導入特定的宿主(受體)細胞,使之無性繁殖并高效表達外源基因或直接改變其遺傳性狀,這個導入過程及操作統稱為重組DNA分子的轉化.
大腸桿菌感受態細胞的制備和轉化
1、感受態細胞：應用一些特殊方法（如點擊法，CaCl2處理）處理后，使細菌細胞膜通透性發生暫時的改變，處于能允許外源DNA分子進入的狀態，即為感受態細胞。2、轉化(Transformation)：是將外源DNA分子引入受體細胞,使之獲得新的遺傳性狀的一種手段。CaCl2轉化法的基本原理是細菌在低溫，
大腸桿菌感受態細胞制備和轉化
實驗概要轉化是將外源基因引入受體細胞，使之獲得新的遺傳性狀的一種手段，它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術。轉化過程所用的受體細胞經過一些特殊方法處理后，細胞膜的通透性發生了暫時性改變，成為允許外源DNA分子進入的狀態，這種細胞稱為感受態細胞。進入受體細胞的DNA分子通過復制，
電轉化感受態細胞的制備
1．電轉化感受態細胞的制備?1. 用槍頭挑取單克隆菌落，投入盛有10ml LB液體培養基的50ml離心管中。（同時做培養基和槍頭的空白對照）?2. 37℃，220rpm，培養14-16個小時。?3. 第二天，以1：100的比例將這10ml菌液倒入1000ml LB液體培養基中，37度，220rpm，
農桿菌感受態細胞的制備和轉化子的驗證
一．農桿菌感受態細胞的制備 （同大腸桿菌質粒DNA的提取），然后將其轉化大腸桿菌，再提取大腸桿菌的質粒DNA進行酶切鑒定。取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml鏈霉素平板劃線，28℃培養2天。挑單菌落接種于5ml YM（0.5g/L KH2 PO4 ,10 g/L Mannitol,2 g
感受態細胞的制備[電轉化法]
體外連接的DNA重組分子導入合適的受體細胞才能大量增殖。為了提高受體菌攝取外源DNA的能力，提高轉化效率以獲得更多的轉化子，人們摸索出了不同的方法處理細菌，使其處于感受態。目前主要采用電轉化法和CaCl2法將外源DNA導入受體細胞中，并需要相應地制備電轉化感受態細胞和CaCl2感受態細胞。實驗目的：
大腸桿菌感受態細胞的制備及轉化的方法和技術
[實驗目的]通過本實驗，掌握大腸桿菌感受態細胞的制備及轉化的方法和技術[實驗原理]細菌處于容易吸收外源DNA的狀態叫感受態。轉化是指質粒DNA或以它為載體構建的重組子導入細菌的過程。其原理是細菌處于0℃，CaCl2低滲溶液中，菌細胞膨脹成球形。轉化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘
大腸桿菌電轉化感受態細胞制備及轉化方法
第一天： 1. 將適合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他營養豐富的 培養基 上,在37°C下過夜培養2. 高溫滅菌大的離心瓶（250-500ml）以備第二天搖瓶用3. 準備幾瓶滅菌水（總量約1.5升）,保存于