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    siRNA實驗成功要點

    1. 對每個基因設計并檢測兩到四個siRNA序列 為了找到潛在靶位點,掃描靶基因中的AA序列。記錄每個AA 3’端19個核苷酸作為潛在siRNA靶位點。潛在靶位點需通過GENBANK數據庫的BLAST分析,去除那些與其它基因明顯同源的靶位點。如果可能,siRNA應根據mRNA低二級結構的區域設計。美國著名RNA產品公司Ambion提供網上在線設計工具,幫助您更快地完成這項工作。網址為:www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.html2. 選擇低GC含量的siRNA Ambion公司研究發現GC含量在40-55%的siRNA比55%以上的活性高。3. 純化體外轉錄siRNA 在轉染前要確認siRNA的大小和純度。為得到高純度的siRNA,推薦用玻璃纖維結合,洗脫(Ambion siR......閱讀全文

    siRNA表達載體的構建

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    實驗方法原理 多數的siRNA表達載體依賴三種RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種,操縱一段小的發夾RNA(short hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達。這三類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子。之所以采用RNA pol

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    介紹 RFect小核酸轉染試劑是國際知名科學家崔坤元博士領導我公司研發團隊在美國西雅圖實驗室研發成功的一種新型的小核酸轉染試劑。RFect可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以內的小分子RNA和DNA,轉染細胞包括絕大多數貼壁生長的細胞,如

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