Silver:LysateforWestern
Grow cellsHarvestSpin downWash with PBSSpin down enough cells to collect a 50-100 μL cell pellet in a FastPrep tubePrepare lysis buffer (beforehand) and chill on icePMSF: 1 mL per 100 mL bufferPLAAC: 100 μL per 100 mL buffer0.5 M Benzamidine: 260 μL per 100 mL bufferUse fresh PMSF: dissolve 0.035g per 1mL 100%EtOH2.5 mM MgCl23 mM KCl0.5% Triton X-100in PBSPBSMT:Add protease inhibitorsAdd 50-100 μL of cold lysis buffe......閱讀全文
Western－Blotting－Protocol
實驗概要The western blot ?(sometimes called the protein immunoblot) is a widely used analytical ?technique used to detect specific proteins in the given s
Immunoblotting－(Western－Blotting)
實驗概要We provide a protocol for SDS-PAGE, Protein Blotting, Immuno-Detection.主要試劑1.?0.3 M TRIZMA? base (Product No. T1503), 20% methanol.2.?0.025 M TRIZ
Western－Blotting－Protocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs.
Western－Blot－(AP)
主要試劑1. Membrane Blocking buffer:5% Milk ? 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA)?3. washing buffer:?
Stripping－Western－Blots
1) After ECL development, wash membrane once for 10min with PBST.2) Incubate the membrane in stripping buffer (see below) in a heat-sealed plastic bag
Western－Blot－Protocol
一、提取抗原蛋白將提取RNA途中留存的樣品，加入150μl 100%酒精充分混勻，靜置5min(RT), 2000×g , 4℃離心5min,?吸取上清至新管中,?加入750μl異丙醇,?混勻,?靜置10min(RT), 12000×g, 4℃離心10min,?棄上清,?加入1ml 0.3mol/L
western－blot原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，經過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體上，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢
Western－bloting－技術
一、實驗目的與原理Western bloting技術是用來檢測蛋白表達的特定的靈敏的方法，由蛋白質的SDS-PAGE、電轉及雜交幾部分組成。雜交技術主要有NC膜封閉，靶蛋白與第一抗體的反應，結合靶蛋白的一抗和二抗的反應，顯色等組成。將凝膠上的蛋白質轉移到NC膜上，用其他蛋白作為封閉液，將膜上余下的其
Western印跡法
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。Western使用的探針是抗體，它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行鑒別和鑒定。儀器：高壓鍋、玻璃勻漿
Western－bloting－綜述
摘要：本文主要是針對Western bloting的原理及操作進行了簡單的闡述，Western印跡法是利用抗原抗體的免疫反應，先將蛋白通過SDS-PAGE電泳分離開來，然后再利用電場力的作用將膠上的蛋白轉移到固相載體（NC膜）上，然后再加抗體形成抗原抗體復合物，利用發光或顯色原理將結果顯示到膜或底片
Western－Blot詳解
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
細胞裂解液作為對照的原因
WCL的全稱是whole cell lysate,中文就是全細胞裂解液對吧?如果是這樣的話,這個部分的目的就是研究細胞里面你想要研究的蛋白表達情況.IP的就是你用抗體pull down以后得到的目的蛋白.我們做co-IP研究A和B蛋白相互作用的時候,一般會在細胞里面轉染質粒,分別表達A和B蛋白.等蛋
Western－blotting樣品準備
實驗概要Preparation of ?lysis buffers, protease and phosphatase inhibitors, lysate from cell ?culture, lysate from tissues, protein concentration, samples
Western免疫印跡（Western－Blot）實驗原理和主要試劑
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。實驗原理與Southern或 Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電
Western樣品制備方法
一、細胞抗原和組織抗原樣品的制備1、細胞抗原的處理方法向收集到的細胞中加入RIPA裂解緩沖液（蛋白酶抑制劑在使用前加入，終濃度為2ug/ml）在冰上裂解30-60min，然后再插入冰盒進行超聲，超聲強度以不產生泡沫為宜，超聲每次2-3s，重復3或4次，12000g離心3-5min，吸取上清備用。2、
Western免疫印跡
?Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。一、原理????與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝
Western－免疫印跡
實驗概要Western免疫印跡（Western ? Blotting）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western ? Blot采用的是聚丙烯
Stripping－for－reprobing－western－blots
實驗概要Stripping ?is the term used to describe the removal of primary and secondary ?antibodies from a western blot membrane. Stripping is useful when on
Stripping－for－reprobing－western－blots
實驗概要Stripping ?is the term used to describe the removal of primary and secondary ?antibodies from a western blot membrane. Stripping is useful when on
Western－Blot－with－Platelet－Protein
OUTLINEWestern blot is a wide used technique to identify a target protein/s for the certain antibody.PROTOCOLPrepare platelets.Lyse washed platelets (
Western－Blot詳解－原理
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。?原理與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢
Western－Blot實驗（二）
小巧的體格，卻一應俱全，可以靈活控制多種應用程序，包括化學發光，熒光，DNA/蛋白膠。可以滿足對實驗室各種樣品成像的要求。是目前市面上唯一的一款既可進行Cy3, Cy5, Cy2 多色熒光LED成像，又可在700和800nm處進行近紅外激光定量熒光western 成像系統。這達到對成像最完美
A－typical－Westernt...
實驗概要Peprotech provides a typical Western-transfer protocol (e.g. for the detection of protein X).實驗原理Western Transfer, also known as Western Blottin
經典的western方法
Western轉膜步驟?下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。?I. 所需材料： ? Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及
Western－Blot詳解（四）
還有一種離子交換型膜是羧甲基（CM）修飾的纖維素膜，它可以結合蛋白和多肽分子，以及其他的一些帶正電荷的樣品，最適結合pH范圍在4-7。結合的多肽分子可以從CM膜上洗脫下來，用于氨基酸系列分析或微測序。5.Marker的相關疑問MM.我用的是可視marker（BIO_RAD），但是電泳總跑不全8條帶，
Western－Blot詳解（八）
DDDD.顯色目的條帶又細又淺，靶蛋白是27KD的bcl-xl和67KD 的c-myc，應該是高表達。每個涌道上50-70μg蛋白，開始用半干轉移，后來用濕轉14v，16h，用PVDF膜轉移。膠轉移后染色檢測，發現小分子量的基本轉移走了，可是為什么條帶老是不粗不濃呢?解答：可能跟你的一抗有關
western－blot試驗心得
前兩天做了一個western blot,現在把試驗中的一點小小的體會發上來，與大家交流，希望大家多多指點！1 本實驗室采用的脫脂奶粉已經存放了近兩年了，雖然是四攝氏度保存，但是其封閉質量還是難以保證的。所以本人的試驗結果中出現了小斑點。建議最好使用BSA或專用的脫脂奶粉進行封閉，雖然貴點，但還是有個
Western－Blot詳解（一）
Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術:一、原理二、分類i.放射自顯影ii.底物化學
Western－Blot實驗（一）
大家都知道Western Blot時間周期較長，大致可以分為忙碌的第一天，和心痛的第二天，像極了愛情。人生若只如初見，何事秋風悲畫扇。經歷轉瞬即逝的新手曙光后，便進入漫長的黑夜。第一天，從最一步的配膠，到最后一步的孵育膜都極細心像極了愛情的萌芽期，需要精心的呵護。第二天經過繁瑣的洗膜，孵二抗，洗膜，
Western轉膜步驟
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠