Western轉膜步驟
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠（mini-gel）（最大的尺寸9cm*9cm）?預先切割好的印記膜：硝酸纖維素（Cat. no. LC2000或LC2001），PVDF（Cat. No. LC2002）或Nylon+（Cat. No. LC2003）?轉印墊（Cat. No. EI9052）?甲醇?去離子水?轉移緩沖液（配方見下文）?用于平衡膜，濾紙和轉移墊的淺盤II. 規格：轉印槽尺寸： 14.5cm x 14cm x 11cmBlot Module容積：約200ml下緩沖液槽容積：600mlBlot尺寸： 約9cm*9cm注意：在以下步驟中，應該始終使用手套以......閱讀全文
Western轉膜步驟
下面的步驟適用于通過Xcell Ⅱ轉印系統進行蛋白印記的大部分應用。為達到最佳效果，用戶的優化是必要的。I. 所需材料：?Xcell SureLock?或Xcell Ⅱ? Mini-Cell以及Blot Module（Cat. Nos. EI10001, EI9001及EI9051）?電泳后的迷你膠
western轉膜放置問題
1. 定義轉膜時與膠接觸的一面為“正”2. 封閉時使用封閉液，液體蓋過膜就好，所以無所謂正反3. 假如用暗室顯影法，將顯影的試劑與“正”面接觸，膠片與“正面”接觸4. 假如用熒光的話，理論上“正”面朝下，掃描，但實際操作過程中貌似都可以的
western轉膜時間和電流
300mA90分鐘,我們是1.0的膠厚度,要是0.75也行,但1.5mm的厚膠要時間長一些,另外你做的蛋白如果超過100kd建議時間更長一些,若是小蛋白就減少轉模時間,立春紅確定最適時間
western－blot轉膜的原理
電場力作用條件下，帶電粒子（PAGE膠中的蛋白）會發生定向遷移；蛋白大小如果超過膜孔徑（0.22μm or 0.45μm），不會透過膜；WB用的膜具有蛋白吸附作用；
Western－不同轉膜方法的取舍
轉膜:小分子量的蛋白半干轉效果比較好，大分子量（100KD）以上建議濕轉。具體轉膜條件需要多摸一下。30-80KD半干轉恒流1mA/cm2，1-1.5h 都可以，大分子濕轉100V，2.5h以上應該可以，轉完膜麗春紅染出的條帶比較清楚的話，一般都能有結果。濕轉，Buffer一定要預冷，最好提前一天配
western－blot－試驗中蛋白轉膜總轉不上去
當然，首先要考慮的問題是你轉過頭了，蛋白質跑出去了。其次你的電流有點大，你也沒說轉了多久？用的干轉還是濕轉？是不是拿出來的時候很熱？這種情況有可能使蛋白質降解。我們一般是濕轉用100mA轉2小時， 干轉所需電流更小。
western－blot－的轉膜緩沖液
目的是為了消除電荷對電泳的影響，western各步驟的緩沖液基本上都是要加的。
western轉膜后marker拖尾原因
western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情因為不同批次轉膜的時候，電壓電流緩沖液溫度等等條件不可能完全保持一致，在各種條件變化的情況下，很容易造成批次間的差異，具體表現就是有時候marker深，有時候淺所以western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情
western－blotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。
western－blotting轉膜是根據什么原理
原理：westernblotting轉膜一般采用“濾紙-凝膠-膜-濾紙”夾心法，凝膠靠近負極，膜靠近正極。因為蛋白上結合有sds，因而帶負電，在電流的作用下會從負極向正極運動，從而轉移到膜上。
Western－轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好
關鍵看效果怎么細分，干轉，速度快，效率稍低，濕轉，速度比較慢，轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主，干轉就挺好的，效率非常高，幾分鐘就做完了。分子量特別大，又沒有其他人的方案做參考，可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話，真是等到花兒也謝了。至于說效果，不是
做western轉膜，用濕轉電泳，還是半干轉電泳好
半干轉要用專門的半干轉膜儀，而濕轉用電泳儀配附件即可；半干轉所需時間較短，但控制不好，中間發熱比較大容易把膜和膠烘壞；而濕轉耗時較長，尤其對大分子量的蛋白轉膜效果較好。相對來講，還是濕法轉膜的實驗室多一些。
Western－轉膜時用干轉還是濕轉效果比較好？
關鍵看效果怎么細分，干轉，速度快，效率稍低，濕轉，速度比較慢，轉移效率高。但是最主要看蛋白的分子量大小。如果普通分子量為主，干轉就挺好的，效率非常高，幾分鐘就做完了。分子量特別大，又沒有其他人的方案做參考，可以先試試濕轉。就是幾個小時等得比較痛苦。好幾個人做的話，真是等到花兒也謝了。至于說效果，不是
western－blot轉膜－膜上有白點點怎么回事
封閉的時候才出現的白點，是不是奶粉沒有完全溶解啊。重新溶解下奶粉，然后用0.45或者0.21um的濾膜過濾一下，看情形能不能好轉。另外還得根據結果來看，如果白點最后顯影都變成黑點，奶粉沒有溶解的可能性就比較大了。
請教western轉膜封閉后怎么辦
western blot中封閉主要是起去除非特異性吸附的作用在western blot轉膜時，PVDF膜在甲醇活化后是帶電的，因而在轉膜時會將蛋白吸附。封閉的目的就是要將PVDF膜上無蛋白的部分空隙用奶粉填滿，以免孵抗體的時候一抗二抗與之結合，產生非特異條帶或者是背景雜亂。所以western blo
western－blot轉膜是怎么做的
蛋白免疫印跡( Western Blot) 是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質從凝膠轉移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上。目前主流方法是電轉印法，分為濕式轉印與半干轉印。濕式轉印是將膠塊垂直方向夾在濕式轉印槽內進行電轉印。以E-Blotter濕轉槽為例，一般使用垂直電泳槽的緩沖液槽體，將內部垂直電
轉膜實驗原理與操作步驟
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定，是進行各種后續研究(如 RFLP 分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。 實驗目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟 實驗原理： 1. ?轉膜的方式： 向上的毛細管
western轉膜之后，封閉之前要不要洗
westernblot中封閉主要是起去除非特異性吸附的作用在westernblot轉膜時，pvdf膜在甲醇活化后是帶電的，因而在轉膜時會將蛋白吸附。封閉的目的就是要將pvdf膜上無蛋白的部分空隙用奶粉填滿，以免孵抗體的時候一抗二抗與之結合，產生非特異條帶或者是背景雜亂。所以westernblot中封
Western－Blot轉膜時膠和膜放反了有影響嗎
那蛋白就都轉到濾紙上去了，沒有到膜上。你找點麗春紅染染膜看看，估計膜上什么也沒有哇。不用往下做了。當然，如果你在膜上看到預染Marker了，還是值得再去嘗試一下的。
western轉膜后marker拖尾是怎么回事
western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情因為不同批次轉膜的時候，電壓電流緩沖液溫度等等條件不可能完全保持一致，在各種條件變化的情況下，很容易造成批次間的差異，具體表現就是有時候marker深，有時候淺所以western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情
western轉膜后marker拖尾是怎么回事
western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情因為不同批次轉膜的時候，電壓電流緩沖液溫度等等條件不可能完全保持一致，在各種條件變化的情況下，很容易造成批次間的差異，具體表現就是有時候marker深，有時候淺所以western轉膜有時候marker深，有時候淺是很正常的事情
免疫印跡（Western－Blot）不同蛋白的轉膜條件
蛋白來源:RAW264.7 總蛋白蛋白名稱:一些轉錄因子蛋白分子量:40~70 KDWB 用膜類型、孔徑:0.45 NC轉膜方式(恒壓、恒流):濕轉 恒流 400 mA轉膜時間:60~90 minPS. 其實吧,以我的經驗來看,除非目的蛋白特別小,或者特別大,不然轉膜時間真的不是那么重要, 曾經因為
western－blot轉膜過程中需要注意些什么
最重要的就是SDS-PAGE膠和膜之間不要有氣泡。。其次就是轉膜的電壓和時間要和蛋白大小對應上
western－blot－電泳液和轉膜緩沖液的配方
5*SDS-PAGE電泳緩沖液 0.125M tris 15.1g, 1.25M glycine 94g,0.5% SDS 5.0g,加入800ml去離子水，攪拌溶解。加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。用的時候稀釋成1*的就可以了。轉膜緩沖液的配制方法：39mM glycine 2.9g,48
電泳、轉膜
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物（一般是尼龍膜）上固定，是進行各種后續研究（如RFLP分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究）的前提。實驗目的：掌握Southern blotting的原理及操作步驟。實驗原理：1. 轉膜的方式： 向上的毛細管轉移 向下的毛細管轉移 同時向
western－blot實驗怎么樣轉膜能夠節省時間
轉膜你用的是濕轉的方法嗎？濕轉速度比較慢，一般的半干轉能快點，30-45min轉完，現在市面上有很多快速半干轉，3-15min可以完成轉印，可以在轉膜這一步節約一些時間。我還能想到另外一個可以節約時間的部分，就是檢測，如果以前壓膠片，現在可以考慮用成像儀，這個也可以節省一些時間。至于抗體孵育的時間，
Western－blot轉印的優化
從SDS凝膠中進行Western蛋白轉印的優化需要對一系列參數進行考慮。目的是轉印所有凝膠上的蛋白并將其定量地轉移到轉印膜上。進行高效轉印需要一定程度的優化，尤其是對于大分子量和小分子量蛋白。轉印后，凝膠上應不殘留或殘留很少的蛋白。可以在轉印后進行染色進行檢測。轉移出凝膠的蛋白應該僅在接觸凝膠的膜的
Western－Blot轉膜技術要點
這個年過的有點崎嶇，在面對社會性問題時疫情給我們帶來了很多正能量，相信很多還沒返校的人已經給自己立了flag。在我們回望過去的一年，這個時代已經變了。任何的進步都被透明公開的呈現在我們面前，而我們看到的好消息遠比自己收獲的多，所以我們總忍不住問自己，“我成長了嗎？”“我的實驗能順利些嗎？” “我
Western－Blot轉膜技術要點
這個年過的有點崎嶇，在面對社會性問題時疫情給我們帶來了很多正能量，相信很多還沒返校的人已經給自己立了flag。在我們回望過去的一年，這個時代已經變了。任何的進步都被透明公開的呈現在我們面前，而我們看到的好消息遠比自己收獲的多，所以我們總忍不住問自己，“我成長了嗎？”“我的實驗能順利些嗎？” “我的科
Western實驗步驟
一、樣品制備?對于Western Blotting實驗而言，樣品處理是關鍵步驟之一，獲得的蛋白樣品必須均質、可溶，并解離成單個多肽亞基，且盡量減少相互間的聚集，使其最終僅依賴本身的分子量大小進行分離。當目標蛋白的含量很低時，需要選取目標蛋白含量較高的組織或細胞器（如核抽提物），或者通過免疫沉淀等方式