SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝膠中向正極遷移。不同的大小的肽鏈由于在遷移時受到的阻力不同，在遷移過程中逐漸分開，其相對遷移率與分子量的對數間成線形關系。pGLO是將綠色熒光蛋白（GFP）的基因克隆在阿拉伯糖啟動子之后的一種表達載體。攜帶有pGLO的大腸桿菌在含有相應誘導物和抗菌素的條件下培養，可以表達GFP，這比不加誘導物的同樣的大腸桿菌在SDS—PAGE凝膠上要多出一條明顯的條帶。表達的蛋白也可用非變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，紫光燈下可以看到誘導后的樣品在凝膠上有綠色熒光條帶出現。還可以通過免疫印跡染色（Western—blotting）的方法，用GFP的抗體......閱讀全文
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達
[實驗原理] SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達
實驗方法原理SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測外源蛋白的表達
[實驗原理]SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中經常使用的一種方法。它是將蛋白樣品同離子型去垢劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以及巰基乙醇一起加熱，使蛋白變性，多肽鏈內部的和肽鏈之間的二硫鍵被還原，肽鏈被打開。打開的肽鏈靠疏水作用與SDS結合而帶負電荷，電泳時在電場作用下，肽鏈在凝膠
酵母表達外源蛋白（foreign protein）（4）
15、菌體密度：菌體是在BMMY中培養的，可以不用BMMY做對照，在600nm處測OD值，培養基和PBS光吸收都很低，PBS更方便。麥芽浸提液培養酵母（不換液，補料），生長階段結束后，密度可達到10-12，誘導培養結束后，密度可達到18左右。如果用1體積的BMGY，在生長階段結束后，換液時，加入1/
酵母表達外源蛋白（foreign protein）（2）
如果是用自己配置的培養基，如玉米浸提液、麥芽浸提液、麥麩浸提液等等，可以不用換液，采取添料來維持酵母對培養基的營養需要。用無機鹽進行大規模發酵，更省錢。大規模發酵時，甲醇的流加速度增加不要太快。另外使用純氧并不昂貴，在武漢買個鋼瓶600元左右，一瓶純氧20元。一個批次100h左右估計3－4 瓶氧氣。
酵母表達外源蛋白（foreign protein）（5）
或者第5步和第6步改為丙酮洗:5.加入200ul冰冷的丙酮，用手指輕彈EP管，洗去管底和管壁殘余的TCA。6.15000g,離心10－20分鐘,倒掉上清，將EP管倒扣在吸水紙上輕輕控幾下，除去殘余在管口的液體。樣品是酵母細胞超聲后離心獲得的上清，用Loading buffer溶解蛋白沉淀，始終不
酵母表達外源蛋白（foreign protein）（3）
12、蛋白降解分泌表達的目標蛋白比胞內蛋白確實容易被降解。可以嘗試以下幾種辦法：1、盡可能降低培養液的pH值減少酶活，酵母生長pH值比較廣，4～7都可以試一下；2、多試幾種蛋白添加劑，充當酶解底物（比如酵母酸）；3、摸索最適下罐（搖瓶也一樣），寧可少表達點也別給降解光了。實在沒辦法，只好換菌株或做p