PCR引物設計原則
PCR-引物設計原則 1.引物最好在模板cDNA的保守區內設計。 DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。 2.引物長度一般在15~30堿基之間。 引物長度（primer length）常用的是18-27 bp，但不應大于38，因為過長會導致其延伸溫度大于74℃，不適于Taq DNA 聚合酶進行反應。 3.引物GC含量在40%~60%之間，Tm值最好接近72℃。 GC含量（composition）過高或過低都不利于引發反應。上下游引物的GC含量不能相差太大。另外，上下游引物的Tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解鏈溫度，即在一定鹽濃度條件下，50%寡核苷酸雙鏈解鏈的溫度。有效啟動溫度，一般高于Tm值5~10℃。若按公式Tm= 4（G+C）+2......閱讀全文
Troubleshooting for PCR and multiplex PCR
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE
多重PCR（Multiplex PCR）
一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定.多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同.??? 多
多重PCR（Multiplex PCR）
一般PCR僅應用一對引物，通過PCR擴增產生一個核酸片段，主要用于單一致病因子等的鑒定.多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同.??? 多
PCR簡介/PCR儀
PCR的要素基本的PCR須具備PCR儀圖冊1.要被復制的DNA模板 Template2.界定復制范圍兩端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料（四種脫氧核苷酸）及水。 PCR儀工作原理利用升溫使DNA變性，在聚合酶的作用下使單鏈復制成雙鏈，進而達到基因復制
重疊PCR—overlap PCR
1、簡介?重疊PCR也是基本的PCR原理：變性-退火-延伸。不同的是在重疊PCR過程是兩個或者幾個片段重疊延伸之后，再進行指數擴增的PCR過程。 ?2、基本原理*步：PCR產生兩個或者幾個片段，這幾個片段之間必須有重疊區。?第二步：以兩個片段為例，見上圖，*步產生的兩個片段，A D鏈之間有互補，B
普通PCR梯度PCR 原位PCR 熒光定量PCR儀的區別
普通PCR儀： 一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。如；（ABI 2720） 梯度PCR儀： 一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱
反轉錄PCR（RT-PCR, Reversed Transcript PCR）
1 原理 RT—PCR是一種將cDNA合成與PCR技術結合分析基因表達的快速靈敏的方法，主要用于對表達信息進行檢測或定量分析,還可以用來檢測基因表達差異而不必構建cDNA文庫克隆cDNA。RT-PCR的模板可以為總RNA或poly(A)+選擇性RNA。逆轉錄反應可以使用逆轉錄酶，以隨機引物、ol
直接原位PCR（In situ PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
直接原位PCR（In situ PCR）
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。一、組織切片和細胞樣品的制備試劑與配置10%福爾馬林；二甲苯；PBS操
反向PCR （inverse-PCR）
利用反向PCR可對未知序列擴增后進行分析，探索鄰接已知DNA片段的序列，并可將僅知部分序列的全長cDNA進行分子克隆，建立全長的DNA探針。可用于：（1）基因游走研究；（2）轉位因子研究；（3）已知序列DNA旁側病毒整合位點分析等研究。實驗方法原理反向PCR可用于研究與已知DNA區段相連接的未知染色