Southern印跡實驗
印跡法 堿性緩沖液法 向下毛細管轉移法 電轉印法 實驗方法原理 本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒 HCl NaCl Tris NaOH SSC 溴化乙錠 儀器、......閱讀全文
Southern－印跡實驗——印跡法
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
Southern－印跡實驗
實驗方法原理?本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料?DNA試劑、試劑盒?HClNaClTrisNaOHSSC溴化乙錠儀器、耗材?電泳儀紫外透射儀實驗步驟 一、向上毛細管轉移法的轉移疊層系統：：圖一、向上毛細管轉移法的轉移
Southern－印跡實驗
印跡法 堿性緩沖液法 向下毛細管轉移法 電轉印法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設
Southern印跡技術
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
Southern印跡雜交
?實驗原理核酸分子雜交技術是分子生物學領域中zui常用的具體方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為
DNA印跡（Southern－Blot)實驗
【實驗原理】DNA印跡是1975年由英國Southern創建的。其基本原理是：DNA分子經限制性核酸內切酶酶切后，由瓊脂糖凝膠電泳將所得 DNA片段按分子質量大小分離，然后將DNA片段變性，并使凝膠中的單鏈DNA片段轉移到尼龍膜、硝酸纖維素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA 片段
Southern－印跡實驗——電轉印法
實驗方法原理因為聚丙烯酰胺凝膠的扎徑太小，DNA不能在其橫截面上有效地擴散，毛細管轉移法不適用DNA從聚丙烯酰胺凝膠的轉移。因此，聚丙烯酰胺凝晈必須在低離子強度的緩沖液中用電轉移法進行印跡。實驗材料DNA試劑、試劑盒TBE儀器、耗材Scotch-Brite墊Whatman濾紙實驗步驟1. ?在非變性
Southern印跡法的技術方法介紹
Southern印跡法(Southern Blot)是將基因組 DNA經限制性內切酶酶解、瓊脂糖凝膠電泳分離，使DNA片段按分子量大小排列在瓊脂糖凝膠上。經堿處理凝膠使DNA變性（使雙鏈DNA變成單鏈），通過具有一定鹽離子濃度溶液的毛細管作用，將凝膠中變性的單鏈DNA片段原位地吸印到硝酸纖維素濾膜或
Southern印跡技術原理和操作步驟
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
southern印跡雜交的方法步驟
以哺乳動物基因組DNA為例，介紹Southern印跡雜交的基本步驟。一、 待測核酸樣品的制備（一）制備待測DNA基因組DNA是從動物組織（或）細胞制備。1.采用適當的化學試劑裂解細胞，或者用組織勻漿器研磨破碎組織中的細胞；2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白質和RNA；3.用有機試劑（酚/氯仿）抽提
outhern印跡及基因組DNA雜交技術實驗——Southern－印跡
實驗方法原理硝酸纖維膜或尼龍濾膜對單鏈DNA的吸附能力很強，當電泳后凝膠經過DNA變性處理，覆以上述濾膜，再于其上方壓上多層干燥的吸水紙，借助它對深鹽溶液的上吸作用，凝膠上的單鏈DNA將轉移到濾膜上。轉移是原位的，即DNA片段的位置保持不變。轉移結束后，經過80℃烘烤的DNA，將原位地固定于膜上。實
Southern－印跡實驗——堿性緩沖液法
實驗方法原理用帶正電荷的尼龍膜時，如果用堿性轉移緩沖液，則轉移的DNA可共價結合于膜上。實驗材料DNA試劑、試劑盒NaOHNaCl儀器、耗材電泳儀實驗步驟1. ?印跡法中步驟1和歩驟2中所述準備凝膠及用0.25 mol/l HCl處理。2. ?用蒸餾水漂洗凝膠，并用10倍體積的0.4 mol/l N
Southern印跡法的基本原理
Southernblot的基本原理是：硝酸纖維膜或尼龍濾膜對單鏈DNA的吸附能力很強，當電泳后凝膠經過DNA變性處理，覆以上述濾膜，再于其上方壓上多層干燥的吸水紙，借助它對深鹽溶液的上吸作用，凝膠上的單鏈DNA將轉移到濾膜上。轉移是原位的，即DNA片段的位置保持不變。轉移結束后，經過80℃烘烤的
southern印跡雜交的基本概念
Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則特異性地雜交形成雙鏈。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干
Southern印跡法的原理和功能特點
Southernblot的基本原理是：硝酸纖維膜或尼龍濾膜對單鏈DNA的吸附能力很強，當電泳后凝膠經過DNA變性處理，覆以上述濾膜，再于其上方壓上多層干燥的吸水紙，借助它對深鹽溶液的上吸作用，凝膠上的單鏈DNA將轉移到濾膜上。轉移是原位的，即DNA片段的位置保持不變。轉移結束后，經過80℃烘烤的DN
Southern印跡雜交實驗原理和方法2
（一） 細管虹吸印跡法此法是利用濃鹽酸轉移緩沖液的推動作用將凝膠中的DNA轉移到固相支持物上，轉移方式見圖10－1：容器中的轉移緩沖液含有高濃度的NaCl和檸檬酸鈉，上層吸水紙的虹吸作用使緩沖液通過濾紙橋、濾紙、凝膠、硝酸纖維素膜或尼龍膜向上運動，同時帶動凝膠中的DNA片段垂直向上運動而滯留在膜上。
Southern印跡雜交實驗原理和方法1
實驗原理核酸分子雜交技術是分子生物學領域中最常用的具體方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為了進一
Southern印跡雜交實驗原理和方法3
真空轉移法的最大優點是迅速，可在轉膜的同時進行DNA變性與中和整個過程約需30～60分鐘。但在操作中應注意兩個問題，一是真空壓力不能太大，若壓力過大，凝膠被壓縮，轉移效率會降低；二是真空轉移液要密封嚴，防止漏氣影響壓力的產生。下表列出了不同的印跡方法。表10－2 不同印跡方法的比較表五、探針標記用于
Southern印跡及基因組DNA雜交技術實驗
實驗材料 基因組 DNA試劑、試劑盒 限制性緩沖液儀器、耗材 瓊脂糖凝膠實驗步驟 1. 7~20 μg 基因組 DNA 稀釋到 500 μl 合適的限制性緩沖液中。4℃ 過夜。2. 每管加 10~20 單位限制性酶。孵育 4~6 小時。10 μl 消化液在小瓊脂糖凝膠上電泳檢測消化的程度。如果需要，
Southern印跡及基因組DNA雜交技術實驗
放射性標記的探針與固定化核酸進行雜交試劑、試劑盒預雜交液SSCSDS儀器、耗材硝酸纖維素濾膜實驗步驟1. 準備適合即將進行的工作的雜交溶液。每平方厘米硝酸纖維素濾膜或尼龍膜大約需要 0.2 ml 預雜交液。預雜交液：用于檢測低豐度序列：或者6x SSC ( 或 6x SSPE)5 x Denhard
Southern印跡及基因組DNA雜交技術實驗
Southern 印跡 放射性標記的探針與固定化核酸進行雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 硝酸纖維膜或尼龍濾膜對單鏈DNA的吸附能力很強，當電泳后凝膠經過DNA變
Southern－印跡實驗——向下毛細管轉移法
實驗方法原理向上毛細管轉移法的一個缺點是凝膠可能被加于其上面的加有重物的濾紙層和紙巾塔壓緊，從而降低毛細管作用。實驗材料DNA試劑、試劑盒SSC儀器、耗材轉移塔濾紙實驗步驟一、實驗步驟1. ?按印跡法步驟1~4（高鹽轉移）所述處理凝膠。2. ?如下圖所示，安裝轉移塔，其組成依次為（1）置于一玻璃平皿
YAC克隆的分析實驗——制備YAC－DNA進行Southern印跡分析
實驗材料酵母菌試劑、試劑盒AHCSCESCEMTris·ClEDTATE乙酸甲RNase A異丙醇NaCl儀器、耗材培養箱離心管轉子實驗步驟1. ?接種一個紅色的含YAC克隆的酵母菌落于盛有20 ml AHC培養基的250 ml 三角燒瓶中，在旋轉搖床上30℃ 250 r/min 振蕩培養24 h。
Southern印跡(毛細管法將DNA轉移到膜上)
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備基因組 DNA 樣品首先要經過一種或多種限制性內切核酸酶的消化，消化后的片段在標準的瓊脂糖凝膠上經電泳按照大小進行分離。DNA 經過原位變性后，從凝膠上轉移到固相支持物上（通常為尼龍膜或者硝酸纖維素膜）。DNA 片段在向
Southern印跡(毛細管法將DNA轉移到膜上)
實驗方法原理 制備基因組 DNA 樣品首先要經過一種或多種限制性內切核酸酶的消化，消化后的片段在標準的瓊脂糖凝膠上經電泳按照大小進行分離。DNA 經過原位變性后，從凝膠上轉移到固相支持物上（通常為尼龍膜或者硝酸纖維素膜）。DNA 片段在向膜轉移的過 程中被保留于相應的位置。實驗材料 適當的限
Southern印跡(毛細管法將DNA轉移到膜上)
制備基因組 DNA 樣品首先要經過一種或多種限制性內切核酸酶的消化，消化后的片段在標準的瓊脂糖凝膠上經電泳按照大小進行分離。DNA 經過原位變性后，從凝膠上轉移到固相支持物上（通常為尼龍膜或者硝酸纖維素膜）。DNA 片段在向膜轉移的過 程中被保留于相應的位置。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培
細胞系的多位點DNA指紋檢測——細胞系－Southern－印跡－DNA－制備
實驗方法原理細胞中提取的 DNA 經限制性酶消化，利用 Southern 印跡技術將消化產物固定在尼龍膜上 [ Ausubel et al.，1996，2002 ]，與來自 M 13 噬菌體的標記 DNA 進行雜交。實驗材料D-PBSHinfI酶及其緩沖液瓊脂糖凝膠5×TBE儲存液EDTA二鈉鹽6×
SOUTHERN－BLOTTING
Materials:Whatman 3 mm Blotting Papernitrocellulose (Schleicher & Schuell, Amersham) or nylon membrane filter (Amersham).Paper towels (preferably C-fo
Southern－Blot
1. Run gel (0.8 -1.0% agarose is best). For yeast chromosomal Southerns, digest 20 μg DNA. Use 50 ml minigel for most purposes. Photograph gel, but mi
Southern雜交
?? Southern雜交可用來檢測經限制性內切酶切割后的DNA片段中是否存在與探針同源的序列,它包括下列步驟: (1) 酶切DNA, 凝膠電泳分離各酶切片段,然后使DNA原位變性。? (2) 將DNA片段轉移到固體支持物(硝酸纖維素濾膜或尼龍膜)上。? (3) 預雜交濾膜,掩蓋濾膜上非特異性