細胞電融合
實驗方法原理 將制備的游離細胞或原生質體，置于電融合室中，在高頻交流電場的作用下，細胞被極化，成為偶極子，造成細胞之間相互連接，如果施加的高頻交流電壓(即正弦波的p-p值)過高或作用時間過長，則細胞連接成串珠狀，應適當控制以上條件，盡量使兩細胞處于點接觸狀態，然后施加方波脈沖予以刺激，由于電脈沖的瞬間作用，可擊破兩細胞接觸點部位的質膜，此時質膜的脂類分子發生重組，同時由于細胞表面的張力作用，使兩細胞融合逐步完全。 實驗材料 動物游離細胞 植物原生質體 試劑、試劑盒 甘露醇 氧化鈉 ......閱讀全文
原生質體的概念
原生質體（Protoplast）：指采用機械或酶解法去掉細胞壁的裸露細胞。
原生質體的培養
原生質體（Protoplast）：指采用機械或酶解法去掉細胞壁的裸露細胞。一、原生質體的應用 由于沒有細胞壁，原生質體為作物遺傳改良和植物學研究提供了極為有利的試驗材料。原生質體可以用于下面幾種研究。1. ?用作細胞雜交服務于作物改良2. ?用作遺傳轉化的對象3. ?研究細胞壁的發生過程4. ?篩選
細菌原生質體融合
?一、目的要求:? ? 了解原生質體融合技術的原理.? ? 學習并掌握以細菌為材料的原生質體融合技術.?二、基本原理:? ? 原核微生物基因重組主要可通過轉化、轉導、接合等途徑,但有些微生物不適于采用這些途徑,從而使育種工作受到一定的限制.1978 年第三屆國際工業微生物遺傳學討論會上,有人提出
細菌原生質體融合
一、目的要求:? ? 了解原生質體融合技術的原理.? ? 學習并掌握以細菌為材料的原生質體融合技術.?二、基本原理:? ? 原核微生物基因重組主要可通過轉化、轉導、接合等途徑,但有些微生物不適于采用這些途徑,從而使育種工作受到一定的限制.1978 年第三屆國際工業微生物遺傳學討論會上,有人提出微
植物原生質體的制備
原生質體是指植物細胞去掉細胞壁的裸露部分。它在培養條件下，①具有再生細胞壁，進行連續的細胞分裂并再生成完整植株的能力；②具有攝取外源大分子、細胞器，以及細菌，病毒的能力，因此是進行遺傳操作，基因轉移的好材料；③通過同種和異種植物的原生質體融合，可產生異核體，實現體細胞雜交，培育出新品種。 實驗原理
原生質體培養的意義
①植物原生質體是細胞無性系變異和突變體篩選的重要來源；②植物原生質體是細胞融合工作的基礎；③植物原生質體是植物遺傳工程的理想受體和遺傳飾變的理想材料；④在細胞生物學與遺傳理論研究上的應用。
植物原生質體的制備
實驗材料 油菜或菠菜或煙草試劑、試劑盒 氯化鈣、蒸餾水、2蔗糖、酶解液儀器、耗材 顯微鏡、離心機、離心管、剪刀、鑷子、吸管、培養皿、載玻片、蓋玻片
植物原生質體的制備
植物原生質體的制備可以用于：（1）由于其具有再生細胞壁，進行連續的細胞分裂并再生成完整植株的能力；（2）具有攝取外源大分子、細胞器，以及細菌，病毒的能力，因此是進行遺傳操作，基因轉移的好材料；（3）通過同種和異種植物的原生質體融合，可產生異核體，實現體細胞雜交，培育出新品種。實驗方法原理去掉植物細胞
原生質體的活力測定
檢驗原生質體是活細胞還是死細胞染色法：①二乙酸熒光素（FDA）法：FDA本來沒有熒光，當其進入細胞后被脂酶分解為具有熒光的極性物，不能透過質膜，而是留在細胞內發出熒光。因此能發出熒光的是具有活性的原生質體。②酚藏花紅染料法:具有活性的原生質體均不著色，而死去的原生質體立即染成紅色。③伊文思藍染色法：
原生質體融合的原理
兩個具有不同遺傳性狀的細胞，采用適宜的水解酶溶解細胞壁后，在自發情況或融合劑作用下，兩個原生質體接觸，融合成為異核體，經過繁殖復制進一步核融合，形成雜合二倍體，再經過染色體交換產生重組體，達到基因重組的目的，并在適宜的條件下再生出細胞壁，對重組體進行生產性能、生理生化和遺傳特性分析獲得所需重組子。其
概述原生質體的制備
原生質體是植物或微生物細胞去掉壁以后的內含物。原生質體的制備主要是在高滲壓溶液中加入細胞壁分解酶，將細胞壁剝離，結果剩下由原生質膜包住的類似球狀的原生質體，它保持原細胞的一切活性。 制備原生質體首先需要選擇供融合的兩個親株。要求親株的性能穩定并帶有遺傳標記，一般以營養缺陷型和抗藥性等遺傳性狀為
什么叫原生質體融合
原生質體是去掉細胞壁的植物細胞，原生質體融合就是植物細胞的融合。常用的方法有振動，電擊，離心，聚乙二醇（PEG）處理等。先用纖維素酶和果膠酶處理原植物細胞，得到原生質體再在培養液中使用上述方法進行融合。這種方法的原理是細胞的流動性。當細胞核完成融合，并且重組細胞重生出細胞壁后，就表明雜種細胞已成功得
原生質體的純化方法
原生質體的純化方法：沉降法、漂浮法、界面法。
酵母原生質體制備
實驗材料?酵母試劑、試劑盒?YPD酵母消解緩沖液山梨醇抽提緩沖液貯存緩沖液液氮儀器、耗材?搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟 ? 將酵母菌接種于YPD培養基（100 ml 到20 L），劇烈搖動或強制通氣條件下培養至對數中期（OD600≈1~5）。培養物在預稱重的離心瓶中于4℃， 1 500 g 離
原生質體的應用介紹
由于沒有細胞壁，原生質體為作物遺傳改良和植物學研究提供了極為有利的試驗材料。原生質體可以用于下面幾種研究。1. 用作細胞雜交服務于作物改良2. 用作遺傳轉化的對象3. 研究細胞壁的發生過程4. 篩選突變體5. 膜的結構、運輸、激素接受位點等的研究6. 用于分離細胞器和大分子7. 種質資源保存
原生質體融合的原理
定義:原生質體融合就是將兩個親株的細胞壁分別通過酶解作用加以剝除,使其在高滲環境中釋放出只有原生質膜包被著自球狀原生質體。然后將兩個親株的原生質體在高滲條件下混合,由聚乙二醇助融,使它們相互凝集,通過細胞質融合接著發生兩次基因組之間的接觸、交換、遺傳重組,在再生細胞中獲得重組體原生質體融合技術簡介.
細胞電融合
細胞電融合的優勢在于（1）融合率高（2）無毒性（3）操作簡便（4）融合后的細胞繼續培養成活率高等。動物的游離細胞以及植物成微生物去壁后的原生質體，在電刺激下進行細胞融合，是細胞工程手段的又一進展。實驗方法原理將制備的游離細胞或原生質體，置于電融合室中，在高頻交流電場的作用下，細胞被極化，成為偶極子，
原生質體融合的基本介紹
植物體細胞雜交（plant somatic hybridization）,又稱原生質體融合（Protoplast fusion ）是指將植物不同種、屬，甚至科間的原生質體通過人工方法誘導融合，然后進行離體培養，使其再生雜種植株的技術。植物細胞具有細胞壁，未脫壁的兩個細胞是很難融合的，植物細胞只有
?原生質體培養技術的概念
原生質體（protoplast）：脫去全部細胞壁的細胞叫原生質體，是一生物工程學概念。原生質體是由質膜所包圍的具有生活力的”裸露細胞“。原生質體培養：對離體植物的原生質體進行培養，形成完整植株的培養技術。
原生質體培養的方法介紹
主要有液體淺層培養法、液體懸滴培養、固體平板法、固液雙層培養法（應用最廣泛）、瓊脂糖珠培養法。
簡述原生質體融合的過程
將植物細胞A與植物細胞B用纖維素酶和果膠酶處理，得到不含細胞壁的原生質體A和原生質體B，運用物理方法或是化學方法誘導融合，形成雜種細胞，再利用植物細胞培養技術將雜種細胞培養成雜種植物體。 雜交時間：植物細胞雜交是從細胞融合開始，到培育成的新植物體結束。 a.原生質體制備：用酶解法去除細胞壁（
什么是原生質體融合技術
原生質體融合(protoplast fusion)指通過人為的方法，使遺傳性狀不同的兩個細胞的原生質體進行融合，借以獲得兼有雙親遺傳性狀的穩定重組子的過程。意義：打破了微生物的種界界限，可實現遠緣菌株的基因重組。可使遺傳物質傳遞更為完整、獲得更多基因重組的機會。可與其他育種方法相結合，如把常規誘變和
原生質體分離的分離方法
（1）機械法分離：缺點：產量極低；應用的材料受限制；操作極費力（2）酶法分離：Cocking最早開展這方面研究，克服了機械法分離的缺陷，可分為直接法和順序法兩種。酶法可在短時間內獲得大量原生質體，缺點是：不純的酶制劑所含雜質對原生質體可能有不同程度的毒害作用。
原生質體發生融合的介紹
由于在自然條件下，原生質體發生融合的頻率非常低，因此在實際育種過程中要采用一定方法進行人為誘導融合。兩株出發菌株制備好的原生質體可以通過化學因子或電場誘導的方法進行融合。 [3] 化學因子誘導是把兩個親株的原生質體混合在一起，加入融合劑聚乙二醇（ polyethylene glycol，PEG
關于原生質體的基本介紹
原生質體是細胞壁以內各種結構的總稱,也是組成細胞的一個形態結構單位，活細胞中各種代謝活動均在此進行。原生質體包括細胞膜（cell membrane）、細胞質（cytoplasm）、細胞核（nucleus）和細胞器（organelle）等。原生質體化學成分十分復雜,其組分也隨著細胞不斷的新陳代謝活
酵母原生質體制備實驗
原生質體由原生質分化形成，具體包括細胞膜和膜內細胞質及其他具有生命活性的細胞器。植物和動物的如細胞核、線粒體和高爾基體等，而細菌如核糖體、擬核等。實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD酵母消解緩沖液山梨醇抽提緩沖液貯存緩沖液液氮儀器、耗材搖床水浴鍋轉子離心機培養箱實驗步驟1. ?將酵母菌接種于YPD培養基（
植物原生質體的特點介紹
植物原生質體具有以下的特點： ①無細胞壁的物理障礙； ②能獲得遺傳性狀和生理性狀較一致的細胞群體； ③植物原生質體同樣具有全能性； ④用組織培養方法可進行大量繁殖。 這些有利的特征決定了原生質體是一個極好的實驗體系，在植物育種上有廣泛用途。
酵母轉化實驗_原生質體轉化
實驗材料酵母試劑、試劑盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG選擇性再生瓊脂儀器、耗材水浴鍋離心機分光光度計培養箱實驗步驟1. ?在實驗前2天，將轉化用酵母菌株的單菌落接種到5 ml YPD培養基中，于30℃培養過夜（如果酵母菌株是溫度敏感的應在低溫下培養）。2. ?轉化前一天晚上，從5 ml 過夜培養
PEG介導的原生質體轉化
PEG介導的原生質體轉化法是通過PEG的介導作用將遺傳因子轉入受體細胞原生質體中的一種方法，原生質體的制備與再生是轉化的關鍵，此外CaCl2也是不可或缺的成分。目前，多數絲狀真菌的轉化以原生質體作為感受態細胞，在一定濃度的CaCl2和PEG等條件下和需轉化的外源DNA混合完成的。因此，PEG介導的原
簡述原生質體融合的原理
植物體細胞雜交（plant somatic hybridization）,又稱原生質體融合（Protoplast fusion ）是指將植物不同種、屬，甚至科間的原生質體通過人工方法誘導融合，然后進行離體培養，使其再生雜種植株的技術。植物細胞具有細胞壁，未脫壁的兩個細胞是很難融合的，植物細胞只有