RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA ends,RACE)是一種基于PCR從低豐度的轉錄本中快速擴增cDNA的5'和3'末端的有效方法,以其簡單、快速、廉價等優勢而受到越來越多的重視。(相關閱讀:精華vol 687 Chapter 4 應用巢式(嵌套式)PCR進行側翼序列測定)經典的RACE技術是由Frohman等(1988)發明的一項技術,主要通過RT-PCR技術由已知部分cDNA序列來得到完整的cDNA5'和3'端,包括單邊PCR和錨定PCR。該技術提出以來經過不斷發展和完善,克服了早期技術步驟多、時間長、特異性差的缺點(Frohma......閱讀全文
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA
RACE技術的原理和操作
近年來隨著生物技術的不斷發展,出現了許多克隆新基因的方法和手段,如圖譜克隆技術、轉座子標簽技術、mRNA差異顯示技術二基因組減法技術以及cDNA文庫篩選技術等。但上述方法人多具有實驗周期長、技術步驟煩瑣且工作量大等特點。cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cD
RACE的原理、應用和優缺點(二)
三、RACE 的應用 RACE技術主要是應用于對全長cDNA序列的獲得,但對該技術進行一定的修改后,也可在其它方面顯示出極高的應用價值。 首先,RACE技術可用于cDNA文庫的構建及篩選。Belyavaasky等(1989)用10個骨髓瘤細胞分離的總RNA,通過TdT加同聚尾、(dT)
RACE的原理、應用和優缺點(一)
一、RACE 的簡介 目前,全長基因的獲得是生物工程及分子生物學研究的一個重點。盡管已經有多種方法可以獲得基因的全長序列,但在很多生物研究中,由于所研究的目的基因豐度較低,從而使得由低豐度mRNA通過轉錄獲得全長cDNA很困難。近年來發展成熟的cDNA末端快速擴增(RACE)技術為從低豐度轉錄快速
SMARTTM 5'-RACE PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5個(dC)殘基,退
SMARTTM 5'-RACE PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5 個(
SMARTTM 5-RACE PCR的原理
SMARTTM 5‘-RACE的原理是先是利用mRNA的3‘末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以Oligo(dT)30?MN作為鎖定引物在反轉錄酶MMLV作用下,反轉錄合成標準第一鏈cDNA。利用該反轉錄酶具有的末端轉移酶活性,在反轉錄達到第一鏈的5‘末端時自動加上3一5個(dC)殘基,
RFLP和RAPD技術原理和操作步驟
原理:DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段長度多態性)已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RFLP是根據不同品種(個體)基因組的限制性內切酶的酶切位點