轉染和轉化的區別
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中,核酸包括DNA (質粒和線性雙鏈DNA ),反義寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究(基因表達調控,基因功能,信號轉導和藥物篩選研究)和基因治療研究。基因轉染需要一定的轉染試劑將帶有目的基因的載體運送到細胞內。早期的磷酸鈣轉染法轉染效率很低,且對很多細胞株無效,因此不能滿足很多科研工作的需要。目前,最常用的轉染試劑是陽離子脂質體和陽離子聚合物,它們在克服細胞屏障方面跟病毒有很相象的特征,容易透過細胞膜。其中,陽離子脂質體在體外基因轉染中有很高的效率,然而在體內,它迅速被血清清除,在肺組織內累積,誘發強烈的抗炎反應,這將導致高水平的毒性,因此,在很大程度上限制了其應用。由于陽離子脂質體的局限性,陽離子聚合物轉染試劑日益受到重視。轉化特指將質粒DNA 或以其為載體構建的重組DN......閱讀全文
轉染和轉化的區別
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中,核酸包括DNA?(質粒和線性雙鏈DNA ),反義寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究(基因表達調控,基因功能,信號轉導和藥物篩選研究)和基因治療研究。基
轉染和轉化的區別
轉染的定義是“將具生物功能的核酸轉移或運送到細胞內并使核酸在細胞內維持其生物功能”。其中,核酸包括DNA (質粒和線性雙鏈DNA ),反義寡核苷酸及RNAi(RNA interference)。基因轉染技術已廣泛應用于基因組功能研究(基因表達調控,基因功能,信號轉導和藥物篩選研究)和基因治療研究。基
質粒轉染和病毒轉染有什么本質上的區別
兩者在本質上并沒有區別。無論是質粒轉染,還是病毒轉染,均是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。隨著基因
轉染和轉染效率測定步驟
LIPOFECTAMINE 2000轉染試劑轉染步驟此實驗步驟設計用來進行24孔板貼壁細胞的瞬時或穩定轉染,其為設計用來在生長培養基中直接加入復合物。1. 轉染前一天,胰酶消化細胞并計數,細胞鋪板,使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清,不含抗生素的正常生長的培養基中。2. 對于每孔細
原生質體融合和溶原性轉化的區別
溶原性轉換:是噬菌體的DNA與細菌染色體重組,使宿主菌遺傳結構發生改變而引起的遺傳型變異。溶原性細菌因此而獲得新的特性。原生質體融合:兩種經過處理失去細胞壁的原生質體混和可發生融合,融合后的雙倍體細胞可發生細菌染色體間的重組。簡單地區別就是溶原性轉換需要噬菌體,而原生質體融合不需要。
影響細胞轉染轉染效率的因素和注意事項
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍;化學介導方法:如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法:有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒
影響細胞轉染轉染效率的因素和注意事項
轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法:電穿孔法、顯微注射和基因槍;化學介導方法:如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術;生物介導方法:有較為原始的原生質體轉染,和現在比較多見的各種病毒介導的轉染技術。理想細胞轉染方法,應該具有轉染效率高、細胞毒性小
癌基因轉化細胞:基因組DNA轉染法
實驗概要?癌基因轉化細胞實驗步驟1.提取基因DNA(含癌基因)。2.DNA準備:取供體DNA50~100微克,加3M NaCl或醋酸鈉使最終濃度至0.3M混勻。3.再加2倍體積無水乙醇,3000轉/分離心10分鐘,去上清。4.加入轉染緩沖液,待DNA充分融解后,再加入2.5M CaCl2,令最終濃度
細胞轉染的概念和應用
隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中,其應用越來越廣泛。
細胞培養和轉染
第三章 細胞培養和轉染?1. 細胞培養(HEK293T)?1) 顯微鏡下觀察細胞,細胞生長狀態良好,去上清;?2) 加入預熱的PBS 3ml, 溫柔地清洗細胞,棄去PBS;?3) 用胰蛋白酶消化細胞,通常75cm2 培養瓶的貼壁細胞用3ml 胰蛋白酶于37oC?處理5min;?4) 待細胞脫落后,加