質粒提取的小技巧
實驗室里經常聽到這樣的抱怨：實驗沒做好，實驗沒結果，心情郁悶。但其實靜下心來查找原因，往往是由于操作上面的不認真，或是一些小小的細節沒有注意到，以下是10個實驗室日常小技巧。 主題： 關于質粒提取的小技巧 內容： 現在用質粒提取試劑盒非常方便，而且菌體培養后，可以多管濃縮提取，提到的質粒量多，可以-20℃保存，以后用于酶切、轉化等實驗，可以提前跑個膠，只要不降解，就可以繼續用，避免每次要用，都要培養一遍再提取一遍。 1.質粒DNA提取 提取質粒的時候，最后一步的酒精揮發很關鍵，基本上是其后續的酶切反應的決定性因素。所以這一步盡量揮發長一點時間，最好是空調吹熱風，或是37度溫箱放長一點的時間，我試過室溫過夜，酶切很好。 將amp濃度提高到200μg/mL，下班前接種，次日一早收獲菌體，此時OD雖然不高，質粒豐度卻不一般。菌體量少些，操作體積(管數)也小(少)。 ......閱讀全文
質粒提取
一、導論已經提出過許多方法用于從細菌中提純質粒DNA，這些方法都含有以下3個步驟:細菌培養物的生長。細菌的收獲和裂解質粒DNA的純化。(一)細菌培養物的生長從瓊脂平板上挑取一個單菌落，接種到培養物中(有含有行當抗生素的液體培養基中生長)，然后從中純化質粒，質粒的提純幾乎總是如此。現在使用的許多質粒載
質粒提取
一、導論已經提出過許多方法用于從細菌中提純質粒DNA，這些方法都含有以下3個步驟:細菌培養物的生長。細菌的收獲和裂解質粒DNA的純化。(一)細菌培養物的生長從瓊脂平板上挑取一個單菌落，接種到培養物中(有含有行當抗生素的液體培養基中生長)，然后從中純化質粒，質粒的提純幾乎總是如此。現在使用的許多質粒載
質粒如何提取
需要掌握技能1. 質粒轉化具體操作步驟：? 將1ul 質粒DNA加入1.5ml的離心管；? 將感受態細菌（competent cells）從－70℃冰柜中取出，快速吸取50ul感受態細菌，加入含質粒DNA的1.5ml的離心管；? 輕輕地旋轉以混勻內容物，在冰中放置30～60 min；? 42度熱休克
質粒提取（三）
10)按步驟8)所述再次輕輕地吸去上清，這一步操作要格外小心，因為有時沉淀塊貼壁不緊，去除管壁上形成的所有乙醇液滴，打開管口，放于室溫直至乙醇揮發殆盡，管內無可見的液體(2-5)分鐘。11)用50μl含無DNA酶的胰RNA酶(20μg/ml)的TE(pH8.0)溶解核酸稍加振蕩，貯存于-20℃。注:
質粒提取（二）
2)加200μl新配制的溶液Ⅱ。溶液Ⅱ0.2mol/L NaOH(臨用前用10mol/L貯存液現用現稀釋)1%SDS蓋緊管口，快速顛倒離心管5次，以混合內容物。應確保離心管的整個內表面均與溶液Ⅱ接觸。不要振蕩，將離心管放置于冰上。3)加150μl用冰預冷的溶液Ⅲ溶液Ⅲ5mol/L乙酸鉀 60ml冰乙
質粒DNA提取實驗
實驗方法原理?質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。?提取質粒的基本步驟分為三步：①細菌的培養和質粒的擴增②細菌菌體的裂解③質粒DNA的純化實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒
質粒DNA提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。
質粒DNA的提取
實驗概要? ? ? ? 通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒。實驗原理? ? ? ? ?堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀質粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0～12.5這個狹窄的范圍內，線性的DNA雙螺旋結構解開而被變性，盡管在這樣的條件下，共價閉環質粒DNA
質粒DNA提取技術
實驗概要通過本實驗，學習和掌握堿裂解法提取質粒的方法和技術。實驗原理質粒是基因工程中常用的載體之一。質粒是染色體外小型雙鏈環狀的DNA，大小在1～200kb之間。堿裂解法提取質粒是根據共價閉合環狀DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們的。在pH值介于12.0～12.5這個狹窄的范圍內，線
質粒DNA提取實驗
堿解法SDS堿裂解法（試劑盒提取）實驗方法原理堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。實驗材料大腸桿菌 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?