常用的幾種細胞凋亡檢測方法詳細步驟（一）
細胞凋亡與壞死是兩種完全不同的細胞凋亡形式，根據死亡細胞在形態學、生物化學和分子生物學上的差別，可以將二者區別開來。細胞凋亡的檢測方法有很多，下面介紹幾種常用的測定方法。第一種 細胞凋亡的形態學檢測根據凋亡細胞固有的形態特征，人們已經設計了許多不同的細胞凋亡形態學檢測方法。1 光學顯微鏡和倒置顯微鏡（1） 未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現發泡現象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。（2） 染色細胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態。2 熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡一般以細胞核染色質的形態學改變為指標來評判細胞凋亡的進展情況。常用的DNA特異性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種染料與 DNA的結合是非嵌入式的，主要結合......閱讀全文
細胞凋亡檢測操作流程三JC1檢測凋亡細胞線粒體膜電...
細胞凋亡檢測操作流程三--JC-1檢測凋亡細胞線粒體膜電位改變凋亡檢測操作流程??三、JC-1檢測凋亡細胞線粒體膜電位改變BD? MitoScreen (JC-1)線粒體膜電位檢測試劑盒（551302）：組分描述JC-1(染料)4瓶，每瓶用于25個樣本。凍干粉，使用前稀釋至儲存液（Stock Sol
常用細胞凋亡檢測方法集錦
細胞凋亡的形態學檢測1 光學顯微鏡和倒置顯微鏡(1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體.貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落.(2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等.凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形
細胞凋亡（apoptosis）的檢測2
【材料】１試劑：吖啶橙貯存液（10mg吖啶橙溶解于100mLPBS中，過濾，4℃避光保存），0.01mol/L、Ph6.8PBS。２器材：吸管，試管，玻片，熒光顯微鏡。【方法】１制備待檢活細胞懸液，濃度約為1×10７/mL。２取95uL的細胞懸液，加5uL的吖啶橙貯存液混勻。３吸一滴混合液
常用細胞凋亡檢測方法（二）
二、磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V法）? 磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于細胞膜的內側，但在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中(圖3)。Annexin-V是一種分子量為35~36KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，
常用細胞凋亡檢測方法（四）
五 TUNEL法? 細胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為脫氧核
細胞凋亡檢測技術與方法
細胞凋亡(Apoptosis)，又稱細胞程序性死亡(PCD: Programmed Cell Death)，是指細胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結束其生命的過程。它是一個主動的，高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。細胞凋亡概念提出至今還不到30年的時間，但由于它在保證多
細胞凋亡檢測技術與方法
細胞凋亡（Apoptosis），又稱細胞程序性死亡（PCD: Programmed Cell Death），是指細胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結束其生命的過程。它是一個主動的，高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。細胞凋亡概念提出至今還不到30年的時間，但由于它在保證多細胞
常用細胞凋亡檢測方法（一）
一、細胞凋亡的形態學檢測1 光學顯微鏡和倒置顯微鏡 （1） 未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現發泡現象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。 （2） 染色細胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等
常用細胞凋亡檢測方法（三）
三、線粒體膜勢能的檢測? 線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡，而線粒體跨膜電位DYmt的下降，被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件，它發生在細胞核凋亡特征（染色質濃縮、DNA斷裂）出現之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細胞凋亡不可逆轉。 線
細胞凋亡及其檢測技術3
2、RT-PCR法檢測細胞bcl-2 mRNA的表達：（1）總RNA提取：為了獲得高質量的真核細胞mRNA，必須使用RNA酶抑制劑。操作過程中應避免RNA酶污染器材和試劑，因此所有剝離、塑料器材先用0.1%DEPC水溶液浸泡12h，然后用無菌的新鮮蒸餾水淋洗數次，塑料器材應采用高壓蒸汽滅菌。玻璃器材
細胞凋亡的幾種檢測方法
一、形態學觀察方法1、HE染色、光鏡觀察：凋亡細胞呈圓形，胞核深染，胞質濃縮，染色質成團塊狀，細胞表面有“出芽”現象。2、丫啶橙(AO)染色，熒光顯微鏡觀察：活細胞核?呈黃綠色熒光，胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側，可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。3、臺盼藍染色：如果細胞膜?不
細胞凋亡檢測技術與方法
細胞凋亡（Apoptosis），又稱細胞程序性死亡（PCD: Programmed Cell Death），是指細胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結束其生命的過程。它是一個主動的，高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。細胞凋亡概念提出至今還不到30年的時間，但由于它在保證多
細胞凋亡檢測方法有哪些
細胞凋亡的形態學檢測1?光學顯微鏡和倒置顯微鏡(1) 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體.貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落.(2) 染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等.凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形
DNA－ladder法檢測細胞凋亡
發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。一、材料與試劑凋亡細胞；蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸鉀白細胞裂解液：pH8.0，10
DNA－ladder法檢測細胞凋亡
實驗概要發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。主要試劑蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L?醋酸鉀白細胞裂解液：pH8.0，10mmol
細胞凋亡的幾種檢測方法
一、形態學觀察方法 1、HE染色、光鏡觀察：凋亡細胞呈圓形，胞核深染，胞質濃縮，染色質成團塊狀，細胞表面有“出芽”現象。 2、丫啶橙（AO)染色，熒光顯微鏡觀察：活細胞核呈黃綠色熒光，胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側，可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。 3、臺盼藍染
細胞凋亡及檢測工具
程序性細胞死亡（Programmed Cell Death, PCD）是有機體在漫長的進化過程中發展起來的細胞自殺機制，在清除無用的、多余的或癌變的細胞，維持機體內環境穩態方面發揮重要作用。程序性細胞死亡調控機制的失調與多種疾病的發生發展相關，如神經變性性疾病、自身免疫病、惡性腫瘤、衰老、病原微
細胞凋亡的早期檢測方法
1、PS（磷脂酰絲氨酸）在胞外膜分布的檢測PS從胞膜內側轉移到外側現象是在細胞凋亡的早期即可發生標志。AnnexinV是一種鈣依賴性的磷脂結合蛋白，能專一性的結合暴露在胞膜外側的PS，使用熒光素標記的AnnexinV 蛋白（如Annexin V-FITC）即可檢測細胞凋亡。由于這是一種凋亡早
細胞凋亡的幾種檢測方法
一、形態學觀察方法 1、HE染色、光鏡觀察：凋亡細胞呈圓形，胞核深染，胞質濃縮，染色質成團塊狀，細胞表面有“出芽”現象。 2、丫啶橙（AO）染色，熒光顯微鏡觀察：活細胞核呈黃綠色熒光，胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側，可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。 3、臺盼藍染色：如果
細胞凋亡檢測解決方案
細胞凋亡與程序性死亡其實從嚴格的詞學意義上來說，細胞程序性死亡（PCD）與細胞凋亡是有很大區別的。細胞程序性死亡的概念是1956年提出的，PCD是個功能性概念，描述在一個多細胞生物體中某些細胞死亡是個體發育中的一個預定的，并受到嚴格程序控制的正常組成部分。例如蝌蚪變成青蛙，其變丨態過程中尾部的消失伴
細胞凋亡的幾種檢測方法
???? 一、形態學觀察方法 1、HE染色、光鏡觀察：凋亡細胞呈圓形，胞核深染，胞質濃縮，染色質成團塊狀，細胞表面有“出芽”現象。 2、丫啶橙（AO)染色，熒光顯微鏡觀察：活細胞核呈黃綠色熒光，胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側，可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。 3、臺盼藍
細胞凋亡（apoptosis）的檢測3
【結果判斷】細胞出現程序化細胞死亡時，在瓊脂糖凝膠電泳帶上呈現有一定間隔的梯狀條帶，而細胞壞死時則呈模糊的片狀條帶（無間隔），陰性對照者僅在近電泳點樣處出現基因組條帶。（3）流式細胞儀觀察－PI染色法【原理及意義】細胞凋亡時，流式細胞檢測可呈現亞二倍體核型峰的特征。此外，根據細胞光散射特點，應用碘化
細胞凋亡及其檢測技術2
（二）熒光法：選用上述最佳濃度作用于腫瘤細胞，培養細胞48h后，收貨細胞用PBS洗2-3次后用0.4%多聚甲醛室溫下固定30min。棄去固定液，并用PBS洗2次后，用1%Triton X-100作用4min加入適量的0.5mg/L DAPI熒光染色60min，用PBS沖洗3次，取10ul滴片，干燥后
DNA－ladder法檢測細胞凋亡
發生細胞凋亡時，內源性核酸酶被激活，染色體DNA鏈在核小體之間被切割，形成180～200個堿基或其整數倍的DNA片段，將這些DNA片段抽提出來進行電泳，可得到DNA梯狀條帶（DNA ladder）。一、材料與試劑凋亡細胞；蛋白酶K（500μg/ml）8mol/L 醋酸鉀白細胞裂解液：pH8.0，10
細胞凋亡檢測實驗原理分析
本實驗用1μg/ml 三尖杉酯堿HT在體外誘導培養的HL-60細胞發生凋亡，同時也有少數細胞發生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）對細胞進行雙重染色，可以區別凋亡、壞死及正常細胞。三尖杉酯堿（HT）是我國自行研制的一種對急性粒細胞白血病，急性單核白血
常用細胞凋亡檢測方法（五）
七、凋亡相關蛋白TFAR19蛋白的表達和細胞定位分析? TFAR19（PDCD5）是由本研究室在國際上首先報導的一個擁有自己知識產權的人類新基因，前期的功能研究表明，它是促進細胞凋亡的增強劑。利用熒光素（FITC）標記的TFAR19單克隆抗體為探針，對細胞凋亡過程中TFAR19蛋白的表達水平及定位
細胞凋亡及其檢測技術1
細胞凋亡又稱程序性細胞死亡（PCD）,是細胞衰老自然死亡的主要方式之一，在機體中承擔著重要的調控作用。它不僅在維持細胞群體數量的穩定、胚胎發育和免疫系統的克隆選擇方面，而且在腫瘤發生、發展、抗腫瘤藥物的治療等方面具有十分重要的作用。細胞凋亡是由基因編程控制的細胞主動參與的自殺過程沒事一種生理性調節機
常用細胞凋亡檢測方法（圖）
一、細胞凋亡的形態學檢測1、光學顯微鏡和倒置顯微鏡（1） 未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現發泡現象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。（2） 染色細胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋
如何用流式檢測細胞凋亡
前言細胞凋亡通常稱為細胞程序性死亡，是由基因控制的主動性細胞死亡過程。越來越多數據發現，細胞凋亡與多種疾病密切相關，如癌細胞具有連續增殖、抵抗細胞凋亡能力，利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫瘤診斷，療效評價和預后預測提供了重要的參考指標。然而很多實驗的同學們，常會碰到上機檢測時細胞死亡太多卻檢測不出凋
DNA片斷化檢測細胞凋亡
細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質發生濃縮， 染色質DNA在核小體單位之間的連接處斷裂， 形成50~300kbp長的DNA大片段， 或180~200bp整數倍的寡核苷酸片段， 在凝膠電泳上表現為梯形電泳圖譜（DNA ladder）。細胞經處理后，采用常規方法分離提純DNA,進行瓊脂糖凝膠和溴